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将RRBC加入正常人血清中，可使B因子活化，激活补体旁路途径致使BRBC溶解。将正常人新鲜血清加热使B因子丧失活性（简称RB），旁路途径不能激活，当加入RRBC时不发生溶血。此时再加入含有B因子的待测血清，旁路途径即被激活，RRBC发生溶血反应。根据溶血程度可测定待测血清中B因子的活性。

1．RRBC悬液制备（见ACH50测定）。

2．RB的制备 取新鲜正常人混合血清（3人以上），56℃水浴加热15min，灭活其中B因子，新鲜使用或分装后冻干保存。

3．取一定稀释度的受检血清与一定量的RB和1％RRBC悬液混合，置37℃水浴30min，离心，取上清用分光光度计429nm读取吸光度（A）值，以参考血清A值作为100％进行换算，低于60％者判定为B因子溶血活性降低。