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FLAG标记物
阅读：656 发布时间：2010-11-24| 序列 | AspTyrLysAspAspAspAspLys（ D Y K D D D D K） |
| 抗体 | 鼠源单抗MI和M2 |
| 供应商 | Sigma-Aldrich，其他供应商 |
| 商品化试剂 | 在E．coli和酵母表达系统的氨基末端和羧基末端标记载体 纯化和标记的抗体以及亲和树脂纯化多肽 |
| 非商品化试剂 | 在E．eoli，酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达的多种载体 |
FLAG标记物是惟一专为标记目的设计的多肽标记物（Hoppetal．1988），其特点是标记物的序列不是来自任何已知的蛋白。该标记物是由8个氨基酸残基组成的多肽，具有亲水性，可置于蛋白的氨基或羧基末端。有两种商品化的抗体MI和M2，可识别FLAG标记物。Mi抗体的结合要求表位是氨基末端，因而仅适用于将标记物连接到蛋白的氨基末端。二价阳离子（为Ca2+）可增强MI抗体与FLAG标记物的结合，因此金属螯合剂，如EDTA可引起其相互作用*或部分破坏，可在很温和的条件下纯化。
M2抗体的存在使该系统显示出更大的应用价值，因为FLAG无论是处于蛋白分子中间或羧基末端，该抗体可识别相同的FLAG表位。M2对FLAG表位的识别不需要二价阳离子的存在，并且可以通过游离的多肽竞争性地将FLAG标记蛋白从M2分子中温和洗脱下来。
多种FLAG标记蛋白可保留全部的生化活性（如转录因子、生长因子和酶），这些标记物亦广泛应用于细胞染色、免疫印迹和免疫沉淀试验中。由于已有各种载体和检测试剂出售，包括抗体亲和树脂和直接标记抗体的商品，使其成为人们常选用的系统。
由于对抗-FLAG抗体的特异性进行了更详尽的研究，使得可以采用其他替代序列（Slootstraetal．1997）和更短部分（Knappik和Pluckthunl994）作为标记物。抗-FLAG抗体产生的本底一般非常低，但M2抗体至少可与一种细胞蛋白发生交叉反应（Schafer和Braunl995）。