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上海源叶生物科技有限公司>技术文章>液相色谱法测定氯霉素CAP残留

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液相色谱法测定氯霉素CAP残留

阅读:640          发布时间:2010-11-13

(1)试剂和材料 除另有规定外所有试剂均为分析纯,水为蒸馏水或相当的去离子水。
①乙酸乙酯:分析纯
②甲醇:紫外光谱级
⑧正己烷:分析纯
④高氯酸:分析纯,o.5mol几
⑤氯霉素标准品:含量≥99%
⑥氯霉素标准溶液:准确称取适量的氯霉素标准晶,用甲醇配成o.10mg/m1的标准贮备液,根据需要吸取适量贮备液,将甲醇吹去后用o.5mol/L高氯酸溶液配制成症当浓度的标准工作液。
(2)仪器和设备
①液相色谱仪:配有紫外线检测器
②均质器:10000r/mln
③离心机:3000r/Hill).
④微量注射器:25,~L、i00~L
(3)测定步骤
①提取与净化 称取5。0s均匀试样(至o.1g)于50ral离心管中,加入lOml乙酸乙酯,称量后在均质器中快速均质lmin,离心3min。再称量,补人损失的乙酸乙酯。移取5.Oral乙酸乙酯提取液,置于带塞尖底离心管中,在45~C水浴中用氮气吹去乙酸乙酯。残留物用o.5ml高氯酸溶液溶解,称量后,加入lml正己烷,振荡lmin,静置分层后用吸管吸弃正己烷层。再重复处理3次。用氮气吹去残余的正己烷,称量,加入高氯酸溶液,以补入损失量。经o.45/zm滤膜过滤后,供测定用。
②测定
a.色谱条件
色谱柱:uBondapakCy
波长:280nm
流动相:甲醇—水混合液(35+65)
流速:lml/mia
色谱柱温度:40~C
b.色谱测定 根据样液中氯霉素含量情况,选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中氯霉素响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积参插进样测定,在上述色谱条件下,氯霉素保留时间约为7.2rain。
(4)空白试验 除不加试样外,按上述测定步骤进行。
(5)计算 用色谱数据处理机或按下列公式计算试样中氯霉素残留量:
X=Acs/Asc
X--试样中氯霉素残留量,mg/kg;
A--样液中氯霉素的峰面积;
As--标准工作溶液中氯霉素的峰面积;
Cs--标准工作溶液中氯霉素的浓度,Ps/ml
c--zui终样液所代表的试样浓度,8/ml。
注:计算结果需扣除空白值。
(6)检测限和回收率
本方法的检测限为o.01mg/kg。
在0.010~1 00mg/kg添加浓度水平上,回收率范围为87.2%一98.3%。
 

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