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超声波细胞粉碎仪破碎细胞问题汇总
阅读：2967 发布时间：2012-4-1超声波细胞粉碎仪破碎细胞问题汇总
大肠杆菌表达外源蛋白，在超声破碎的时候，用含有1%triton-X-100的PBS悬浮，然后超声的效果较好，1%triton-X-100的作用还是很明显的，对其他的一些细菌同样起作用，比如链霉菌。
细菌沉淀直接加样品1buffer，再加5ul的巯基乙醇，混匀，离心，煮沸10min，直接上样，染色脱色步骤如下:将胶放入适量的染色液微波炉里加热1min（下次适当补点醋酸即可）,将染色液换成大量的水（自来水即可）在微波炉煮10min 就可以.
在表达重组蛋白后超声波细胞粉碎仪破碎细胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一会就产生大量泡沫，影响了破碎功率，pbs和tris缓冲液都是这样，zui后都是破碎不*，而我的目的蛋白就在这些未破碎的细胞中。
1、会产生气泡是因为你的探头位置没放好。探头一定要接近底部，约1cm（我一般是距底部0.5mm）。功率根据超声波细胞粉碎仪不同会有所不同，但你可以观察液面，有波动但不要太剧烈就好。
2、破3S停10S，破个二三十次看看。
3、超声波细胞粉碎仪的变幅杆位置摆放也要注意，听声音如果不对的话就要及时调整。另外可以从菌浓度方面考虑。 在破碎时试着加大体积,强度不要超过60%.
4、尝试超8s停8s,对有些菌体蛋白来说，你的方法很难散热，导致蛋白变性产生气泡，停顿时间稍长一些，这种情况多见于包涵体形式的蛋白。
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