ELISA測定的常用模式五--競爭法測抗體
 

    抗體的測定一般不使用競爭法。當(dāng)抗原中雜質(zhì)難以去除或抗原的結(jié)合特異性不穩(wěn)定時，可采用這種模式測定抗體。如乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）和乙型肝炎病毒e抗體（HBe·Ab）的測定，由于e抗原較核心抗原僅多29個氨基酸，e抗原很容易轉(zhuǎn)變?yōu)楹诵目乖?，因此?span lang="EN-US">HBcAb和HBeAb的測定均采用競爭法。但其測定具體模式有區(qū)別?？乖墓滔嗷瓤梢灾苯舆M(jìn)行，亦可以通過相應(yīng)特異抗體而間接固相化。下面就HBcAb和HBeAb ELISA測定具體操作步驟分述如下。

    1．HBcAb的競爭法測定

    （1）先將HBcAg在碳酸鹽緩沖液中4~C過夜包被，形成固相抗原，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。

    （2）同時加入待測樣本和酶標(biāo)的特異抗體，溫育一定時間后洗板；此步中，待測樣本的抗體將與酶標(biāo)抗體競爭與固相上特異抗原結(jié)合。

    （3）加入酶底物，溫育顯色測定，顯色的強(qiáng)弱與待測樣本中的相應(yīng)抗體的含量成反比（圖2-8）

2.HBeAb的競爭法測定

    （1）先將HBeAb在碳酸鹽緩沖液中4℃過夜包被，形成固相抗體，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗原后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)；

    （2）同時加入待測樣本和中和抗原HBeAg，溫育一定時間后洗板；此步中，待測樣本的抗體將與固相抗體競爭結(jié)合與中和抗原HBeAg，待測樣本中HBeAb濃度越高，則與固相HBe—Ab結(jié)合的HBeAg越少，反之亦然；

    （3）加入酶標(biāo)的特異抗體，溫育一定時間后洗板；此步中，酶標(biāo)抗體將與結(jié)合于固相抗體上的特異抗原結(jié)合；

    （4）加入酶底物，溫育顯色測定，顯色的強(qiáng)弱與待測樣本中的相應(yīng)抗體的含量成反比（圖2-9）

    HBeAb之所以要采用此種模式測定，主要是HBeAg的不穩(wěn)定所致，如在固相直接包被HBeAg，則會因為HBeAg向HBcAg的易轉(zhuǎn)變性，而導(dǎo)致測定誤差。

    抗體的競爭法測定不同于只有單個抗原決定簇的小分子抗原的競爭法測定，其測定的可靠性，在很大程度上受競爭抗體的特異性和親和力大小的影響，競爭抗體與待測抗體在結(jié)合的特異性及親和力越接近一致，則測定的可靠性越強(qiáng)，但競爭用抗體均為相應(yīng)抗原免疫動物所得，與機(jī)體感染病毒后所產(chǎn)生的抗體肯定會有所差異，因而，在目前HBeAb和HBcAb的臨床檢測中，常有難以解釋的測定結(jié)果出現(xiàn)，這與其在方法學(xué)上的固有缺陷是分不開的。

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