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關(guān)于細(xì)胞傳代方法

時間:2025/7/2閱讀:135
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一:細(xì)胞與試劑方面

1、細(xì)胞(單層細(xì)胞,鏡檢合適)

2、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)

3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位)

4、7.5%NaHC03 溶液


5、0.25%胰蛋白酶

6、 PBS 洗液。

二:試驗(yàn)小用具方面

1、小方瓶(100m1)

2、克氏瓶

3、膠塞

4、吸管(10ml、1m1)

5、細(xì)胞吹打管(20 ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)

6、C02 孵箱

7、超凈臺

8、倒置顯微鏡

9、4℃、- 20℃冰箱

 

三:細(xì)胞傳代的操作過程

1、挑選細(xì)胞:鏡檢細(xì)胞,挑選成長狀態(tài)杰出,細(xì)胞界限清晰,具有立體感,形狀好無污染、無反常及可疑病變細(xì)胞。

2、制造細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比制造MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),參加滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

3、消化細(xì)胞:先用PBS 洗液沖刷細(xì)胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細(xì)胞瓶內(nèi)參加0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液覆蓋細(xì)胞外表。

4、至細(xì)胞脫落到胰酶中:每瓶參加10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打渙散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再參加10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。

5、加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細(xì)胞接種濃度決定)。

6、填寫傳代記錄。

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