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脂質(zhì)體細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法

時(shí)間:2024/10/21閱讀:415
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1、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法

陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷,能與核酸的磷酸根通過靜電作用,將DNA分子包裹入內(nèi),形成DNA脂復(fù)合物,也能被表面帶負(fù)電的細(xì)胞膜吸附,再通過融合或細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前實(shí)驗(yàn)室轉(zhuǎn)染方法之一,其轉(zhuǎn)染率較高,優(yōu)于磷酸鈣法。

2、磷酸鈣共沉淀法

該方法可重復(fù)性差,而且磷酸鈣溶液對溫度、pH和緩沖鹽濃度的變化十分敏感,對細(xì)胞尤其是原代細(xì)胞毒性較大,也不能采用RPMI培養(yǎng)基,因?yàn)槠浜懈邼舛鹊牧姿猁}。

3、電穿孔轉(zhuǎn)染法

電流能夠可逆地?fù)舸┘?xì)胞膜形成瞬時(shí)的小孔促使DNA分子進(jìn)入胞內(nèi),這種方法就是電穿孔。
當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時(shí)可以用電穿孔法轉(zhuǎn)染。
一般情況下,高電場強(qiáng)度會殺死50%-70% 的細(xì)胞?,F(xiàn)在針對細(xì)胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護(hù)劑,可以大大的降低細(xì)胞的死亡率,同時(shí)提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率。

4、病毒感染

對于脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染與電穿孔轉(zhuǎn)染都無法成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系可以采用病毒感染,腺病毒,腺相關(guān)病毒,逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病毒載體已廣泛用于哺乳動物細(xì)胞體內(nèi)外的基因轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率比較高,適用于較難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。
但是插入的片段長度有一定限制,最重要的是技術(shù)難度比較高,在一般實(shí)驗(yàn)室中很難普及,而且某些病毒起效時(shí)間比較慢,跟不上細(xì)胞這種快速繁殖的速度,如果只是做簡單細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染性價(jià)比不高。

沒有一種方法適用于所有的細(xì)胞和實(shí)驗(yàn),理想的方法應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇,如果只是在細(xì)胞水平做,而且用的是簡單細(xì)胞系,那么脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是綜合比較起來不錯(cuò)的一個(gè)方法。


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