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細胞凋亡檢測實驗原理

時間:2024/4/7閱讀:430
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細胞死亡根據(jù)其性質、起源及生物學意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。

凋亡普遍存在于生命界,在生物個體和生存中起著非常重要的作用。

它是細胞在一定生理條件下一系列順序發(fā)生事件的組合,是細胞遵循一定規(guī)律自己結束生命的自主控制過程。


細胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學和生物化學特征。

在形態(tài)上可見凋亡細胞與周圍細胞脫離接觸,細胞變園,細胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質網(wǎng)擴張、細胞核固縮破裂呈團塊狀或新月狀分布、內(nèi)質網(wǎng)和細胞膜進一步融合將細胞分成多個完整包裹的凋亡小體,凋亡小體最后被吞噬細胞吞噬消化。

在凋亡過程中細胞內(nèi)容物并不釋放到細胞外,不會影響其它細胞,因而不引起炎癥反應。

 

在生物化學上,多數(shù)細胞凋亡的過程中,內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶活化,活性增加。

核DNA隨機地在核小體的連接部位被酶切斷,降解為180-200bp或它的整倍數(shù)的各種片斷。

如果對核DNA進行瓊脂糖電泳,可顯示以180-200bp為基數(shù)的DNA ladder的特征。

 

相比之下,壞死是細胞處于劇烈損傷條件下發(fā)生的細胞死亡。細胞在壞死早期即喪失質膜完整性,各種細胞器膨脹,進而質膜崩解釋放出其中的內(nèi)容物,引起炎癥反應,壞死過程中細胞核DNA雖也降解,但由于存在各種長度不等的DNA片斷,不能形成梯狀帶紋,而呈彌散狀。

一些溫和的損傷刺激及一些抗腫瘤藥物可誘導細胞凋亡,通常這些因素在誘導凋亡的同時,也可產(chǎn)生細胞壞死,這取決于損傷的劇烈程度和細胞本身對刺激的敏感程度。

 

細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質膜。

當細胞壞死時,質膜不完整,PI就進入細胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,凋亡細胞和活細胞不著色。

而一些活細胞染料由于為親脂性物質,可跨膜進入活細胞,因而可進行活細胞染色。


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