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人外周血淋巴細胞未來發(fā)展規(guī)劃

時間:2016-7-19閱讀:1602
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    人外周血淋巴細胞未來發(fā)展規(guī)劃
    人外周血淋巴細胞為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400與泛影酸葡甲胺,適用于從血液分離所需細胞,在醫(yī)療和醫(yī)學生物學研究中廣泛應用。其他人及動物多種比重細胞分離液。
    人外周血淋巴細胞因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細胞的名稱。通常情況下人外周血淋巴細胞是沒有分裂細胞的,只有在異常情況下才能發(fā)現(xiàn)。人外周血淋巴細胞中的小淋巴細胞幾乎都處于G1期或G0期的非增殖狀態(tài)。體外培養(yǎng)時經(jīng)一定劑量的植物血凝素(PHA)刺激,T淋巴細胞可轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨湍讣毎匦逻M入增殖周期,進行有絲分裂。
    人外周血淋巴細胞經(jīng)過68-72小時(三個周期)的短期培養(yǎng),即可產(chǎn)生大量的增殖期細胞群,用秋水仙素(細胞分裂阻斷劑)積累分裂相,可使處在分裂期的淋巴細胞停留在分裂中期或早中期,從而獲得足夠的可供分析的中期分裂相。人外周血淋巴細胞先以碘酒和75%乙醇消毒皮膚。用2ml滅菌注射器吸取約0.2ml肝素,作靜脈穿刺,抽取外周靜脈血1ml。
    人外周血淋巴細胞是體外淋巴細胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵問題,因此,要考慮它的質(zhì)量和濃度。鹽水提取物一般冰凍保存的時間不宜過長,時間長了效價減低。濃度一般用1%~2%,每毫升培養(yǎng)液加0.2~0.4ml;人外周血淋巴細胞濃度過高可能會導致紅細胞凝集。培養(yǎng)箱的溫度應控制在37±0.5℃,溫度過高或過低均會影響細胞生長。培養(yǎng)基的pH值應該在7.2-7.4左右,低了細胞生長不良,高了細胞則會出現(xiàn)輕度的固縮。

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