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人外周血淋巴細(xì)胞未來發(fā)展規(guī)劃

時間:2016-7-19閱讀:1604
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    人外周血淋巴細(xì)胞未來發(fā)展規(guī)劃
    人外周血淋巴細(xì)胞為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400與泛影酸葡甲胺,適用于從血液分離所需細(xì)胞,在醫(yī)療和醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究中廣泛應(yīng)用。其他人及動物多種比重細(xì)胞分離液。
    人外周血淋巴細(xì)胞因不同種屬不同比重分離液的細(xì)胞離散系數(shù)及細(xì)胞帶電不同,所以用戶在定制分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細(xì)胞的名稱。通常情況下人外周血淋巴細(xì)胞是沒有分裂細(xì)胞的,只有在異常情況下才能發(fā)現(xiàn)。人外周血淋巴細(xì)胞中的小淋巴細(xì)胞幾乎都處于G1期或G0期的非增殖狀態(tài)。體外培養(yǎng)時經(jīng)一定劑量的植物血凝素(PHA)刺激,T淋巴細(xì)胞可轉(zhuǎn)變?yōu)榱馨湍讣?xì)胞,重新進(jìn)入增殖周期,進(jìn)行有絲分裂。
    人外周血淋巴細(xì)胞經(jīng)過68-72小時(三個周期)的短期培養(yǎng),即可產(chǎn)生大量的增殖期細(xì)胞群,用秋水仙素(細(xì)胞分裂阻斷劑)積累分裂相,可使處在分裂期的淋巴細(xì)胞停留在分裂中期或早中期,從而獲得足夠的可供分析的中期分裂相。人外周血淋巴細(xì)胞先以碘酒和75%乙醇消毒皮膚。用2ml滅菌注射器吸取約0.2ml肝素,作靜脈穿刺,抽取外周靜脈血1ml。
    人外周血淋巴細(xì)胞是體外淋巴細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵問題,因此,要考慮它的質(zhì)量和濃度。鹽水提取物一般冰凍保存的時間不宜過長,時間長了效價減低。濃度一般用1%~2%,每毫升培養(yǎng)液加0.2~0.4ml;人外周血淋巴細(xì)胞濃度過高可能會導(dǎo)致紅細(xì)胞凝集。培養(yǎng)箱的溫度應(yīng)控制在37±0.5℃,溫度過高或過低均會影響細(xì)胞生長。培養(yǎng)基的pH值應(yīng)該在7.2-7.4左右,低了細(xì)胞生長不良,高了細(xì)胞則會出現(xiàn)輕度的固縮。

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