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氨磺乐灵（Oryzalin）和氟乐灵（Trifluralin）-无毒染色体加倍剂、秋水仙碱替代品

常见染色体加倍剂：

秋水仙碱（olchicine）氨磺乐灵（oryzalin）和氟乐灵 （trifluralin）这类有丝分裂抑制剂在细胞有丝分裂过程中可以与微观蛋白二聚体结合，从而阻止微管进而纺锤丝的形成（Peterson et al., 2003） 。秋水仙碱是zui早用于染色体加倍的试剂，同时也是zui常用的，然而它具有巨毒性并且在使用、运输上多有限制。氨磺乐灵、氟乐灵作为秋水仙碱的替代品，具有与之类似的染色体加倍能力，并且与秋水仙碱相比，具有无毒的特性。

有报道氨磺乐灵处理梨、苹果、猕猴桃、北美杜鹃、香蕉，均能有效诱导染色体加倍，并且可以有效提高外植体的存活率。如，5 – 30 μM 浓度氨磺乐灵处理单倍体苹果小苗后染色体加倍效果要比0.25 – 1.25 mM秋水仙碱的处理效果更好；而10 – 20 μM 浓度氨磺乐灵处理4个香蕉栽培种均可以有效诱导加倍并且显著提高微芽数目，如果使用秋水仙碱的话，需要 125 – 200 倍的浓度来诱导产生染色体加倍的效果，并且还对生苗具有毒副作用。

氟乐灵主要用于芸苔属组织培养，在组织培养前18个小时用氟乐灵处理甘蓝型油菜（Brassica napus）小孢子可以诱导单倍体胚加倍，并且这些加倍的胚可以正常地发育和萌发（Zhao and Simmonds 1995）。此外处理卷心菜（Brassica oleracea var. capitata L.）、小麦小孢子培养物，以及月季分生组织均能有效诱导多倍体化。

溶液配制方法：

氨磺乐灵 （Oryzalin 货号 O630） 是纯度为97.5%的橘黄色粉末，分子量是346.36，不易溶于水，但是极易溶于 DMSO，形成带淡黄色的澄清溶液 。氨磺乐灵的DMSO 溶液应该保存于冰箱中。注意DMSO 在18.5°C 会“结冰”。 DMSO 可以增强氨磺乐灵对植物组织的穿透能力，同样对皮肤组织也有穿透性，因此当操作DMSO时必须佩带手套。在配置氨磺乐灵液体母液的时候，首先要用DMSO 溶解，然后再用水定容，不论母液是如何配置的，切记DMSO 在组织培养基中的终浓度不得高于1 ml/L. 这一点已经被多年植物组织培养实践所验证。以下是配置方法：配置浓度为10 mM 溶液时，先称取氨磺乐灵 并溶于数ml 的DMSO.将这些液体分点滴加到 90 ml 水中并不停搅拌，在这一步由于氨磺乐灵 在水中溶解度比较低，约2.6mg/L,所以当加入到水中时必须快速分散开，以免结晶。 zui后加水定容至100 ml。如果需要获得更高/更低浓度的溶液的话，可以通过调整溶液体积获得。关于该溶液的长期保存稳定性目前还没有任何记录，因此建议短期保存的话可以在冰箱4°保存。

氟乐灵（trifluralin货号：T828） 是纯度为98%的橘黄色粉末。分子量为335.28。同样它溶于DMSO但是不溶于水。 溶液的配制、外观、保存均与氨磺乐灵相同。