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研域教你怎么降低ELISA試劑盒操作的布景噪音

時間:2020/3/11閱讀:1591
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ELISA試劑盒操作中,咱們都認(rèn)為ELISA試驗的原理好像很簡單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗刷和關(guān)閉。然而,即使是平淡無奇的洗刷和關(guān)閉,假如做得不太好,也有或許毀了整個試驗。在試驗結(jié)束時,咱們是否能獲得有意義的信息,這在很大程度上取決于成果的信噪比。布景噪音會影響您對成果的判斷。今天我司怎么教你降低ELISA試劑盒操作的布景噪音。

 

一、洗刷很重要:洗刷步驟看似很無聊,其實很重要,因為假如未結(jié)合的資料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測試劑)殘留在微孔板中,那么它會添加布景噪音。如有必要,可添加洗刷液中的鹽濃度,這會阻撓非特異結(jié)合反應(yīng)。假如布景過高,而您置疑洗刷不夠時,可以測驗添加洗刷次數(shù)。

 

二、關(guān)閉更關(guān)鍵:關(guān)閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占有微孔板中潛在的結(jié)合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會。您當(dāng)然也期望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。假如您的布景過高,置疑關(guān)閉不充分,那么您可以測驗運用更高濃度的關(guān)閉液,或適當(dāng)延伸關(guān)閉時間。

 

三、抗體濃度須優(yōu)化:咱們通常會follow師兄師姐留下來的操作步驟,但是假如試劑稍有不同,則或許需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會添加布景。為了避免這一點,切勿運用過多的一抗或二抗。

 

四、檢測試劑要適量:另一點也很清楚明了:切勿運用過多的檢測試劑。假如濃度過高,或者未正確稀釋,則會導(dǎo)致高布景。也不要顯色過度,如有必要,優(yōu)化一下何時應(yīng)加入終止液。

 

假如您的ELISA試劑盒操作中不幸地遇到了高布景,那么也無需太憂慮,順次檢查ELISA體系中的組分,并排除或許存在的問題。盡心優(yōu)化,相信很快就會有美麗的成果。

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