下面就一一介紹下液相色譜使用中的幾個重要環(huán)節(jié)吧。
實驗前的準(zhǔn)備工作
1. 過濾流動相。為了保證流動相潔凈，流動相使用前都必須微膜過濾。
2. 流動相脫氣。為了避免流動相中氣泡對儀器（氣泡可能會對儀器及相關(guān)設(shè)備的正常使用及壽命產(chǎn)生一定影響）及分析結(jié)果的影響。
3. 運(yùn)行液相泵前盡量先清洗泵柱塞部件。清洗液一般采用10%甲醇溶液，也有采用10%異丙醇溶液（5%甲醇或異丙醇等有機(jī)相溶液能避免微生物污染，但濃度不能太高，高于20%緩沖液可能會導(dǎo)致鹽結(jié)晶析出，碰到酸堿類物質(zhì)可能會有比較強(qiáng)烈的反應(yīng)；另外異丙醇粘度較大，清洗能力較強(qiáng)；也有采用純水清洗的，這樣如果儀器每天使用還行，如果長期不用，為了防止微生物繁殖，純水還得用含有有機(jī)相的清洗液置換出去）沖洗，這是為了保護(hù)泵柱塞和密封圈等部件在泵運(yùn)行時不被結(jié)晶鹽等磨損而導(dǎo)致泵頭漏液。
4. 每天運(yùn)行儀器前先排氣。一般的液相色譜儀都有排氣功能，沒有的可以不接色譜柱開機(jī)運(yùn)行幾分鐘排氣。
5. 泵運(yùn)行時盡量不采用大流量模式（主要是換流動相或排氣泡等，流量盡量設(shè)為3.0ml/min以內(nèi)，這樣更有利于保護(hù)泵柱塞桿和密封圈等部件的壽命）。
6. 分析前先對色譜系統(tǒng)（整個流路）進(jìn)行沖洗及平衡，尤其是色譜柱。先用純甲醇沖洗30分鐘，再換10%甲醇水溶液沖洗30分鐘，后換含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)的流動相平衡30分鐘。色譜柱如果長期沒用，每一步?jīng)_洗、平衡量盡量為色譜柱柱容量20倍以上）。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，純甲醇沖洗完可直接換為流動相。使用色譜柱前知道或懷疑色譜柱中殘留有或酸堿鹽類物質(zhì)，在用純甲醇沖洗前增加一步10%甲醇水溶液沖洗。
7. 如果色譜柱需要控溫（升溫），要先運(yùn)行泵后再設(shè)柱溫箱溫度。
8. 待儀器運(yùn)行穩(wěn)定后（基線基本走平后，這個是經(jīng)驗值），方可進(jìn)樣。
樣品前處理
1.樣品濃度不要太大，雜質(zhì)不要太多，否則色譜柱處理起來壓力很大。
2.進(jìn)樣前樣品一定得先經(jīng)微膜（一般采用0.22um或0.45um微膜）過濾。
實驗過程中注意事項
1.為了避免進(jìn)樣器殘留影響，進(jìn)樣前先對進(jìn)樣器進(jìn)行清洗（這個不是必須的，但盡量是每進(jìn)一針樣品或標(biāo)準(zhǔn)品前都清洗進(jìn)樣器和進(jìn)樣針，當(dāng)然同一樣品也可以不洗，不同樣品盡量洗），清洗順序為純水、甲醇、流動相。
2.每進(jìn)一針樣品后要對系統(tǒng)進(jìn)行一次沖洗、平衡后再進(jìn)下一針樣品（等度要求不高，梯度要求相對高，主要是沖洗色譜柱中殘留的強(qiáng)保留物質(zhì)）。
實驗完畢的后續(xù)工作
1.做完樣要先清洗進(jìn)樣器，清洗順序為純水、甲醇。
2.關(guān)閉柱溫箱溫度設(shè)置。
3.沖洗色譜系統(tǒng)及色譜柱。先用10%甲醇水溶液沖洗30分鐘后換為純甲醇沖洗30分鐘，待基線基本走平停泵。如果流動相中不含緩沖鹽或酸堿類物質(zhì)，沖洗時流動相可直接換為純甲醇。色譜柱用完后如果長時間內(nèi)不會再用，純甲醇沖洗量要大于色譜柱柱容量20倍以上的，沖洗后卸下，兩端密封保存。
4.待色譜柱溫度降至接近于室溫時再停泵、關(guān)機(jī)（這一點需特別注意，目的是防止溫度過高損壞色譜柱）。
5.關(guān)機(jī)前用清洗液清洗柱塞桿。