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內(nèi)毒素檢測時,血液前處理方法的注意點有哪些?

時間:2022/12/7閱讀:996
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1、在進(jìn)行血中內(nèi)毒素測定時,要注意選擇方法和試劑。

 

2、血漿或血清制備

作為臨床上常用樣本主要為血漿,其使用率占95%以上,因此作為體液主要部分血漿的制備就顯得十分重要。據(jù)Das報道內(nèi)毒素一般除了游離狀態(tài)外,還大量附著在血小板上因此用含有大量血小板的血漿作為樣品更為合適。在制備人血漿或動物血漿時,目前國外為了防止細(xì)胞的破壞多采用低溫分離,使用含有大量血小板的血漿樣品,即在41000gx10分鐘分離條件,或在無低溫離心機(jī)時用3000gx40秒分離條件。切不可在常溫下進(jìn)行高速、長時間分離,另外在分離血漿或血清時,要避免細(xì)菌的污染。

 

血清的制備用不加抗凝劑的注射器采血轉(zhuǎn)入離心管中,在冰水浴中放置30分鐘,4條件下、1000xg、10分鐘進(jìn)行離心分離血清。

 

血漿或血清分離后,若暫時不用,可在-80℃冰凍保存,并在1個月以內(nèi)使用。注意為了避免吸附內(nèi)毒素,請使用玻璃制試管保存。

 

 

3、抗凝劑種類及影響

在制備血漿時由于加入一定的抗凝劑,因此抗凝劑的種類和加入量對于回收率都有很大的影響,一般常用抗凝劑主要有肝素枸櫞酸鈉及EDTA,其中以肝素的使用最多。然而,我們知道大量的肝素會對內(nèi)毒素反應(yīng)有干擾作用,尤其對稀釋加熱法和氯仿提取法將使回收率下降,而對PCA法影響較少,因此在制備血漿時肝素的加放量只需2~5μl/ml即可。

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