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1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了 食品中霉菌和酵母 (moulds and yeasts)的計(jì)數(shù)方法

本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于各類食品中霉菌和酵母的計(jì)數(shù),第二法適用于番茄醬罐頭、番茄汁中霉菌的計(jì)數(shù)。

2設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：

• 2.1 培養(yǎng)箱：28°C士1°C。

• 2.2 拍擊式均質(zhì)器及均質(zhì)袋。

• 2.3電子天平：感量 0.1g。

• 2.4 無(wú)菌錐形瓶：容量 500 mL。

• 2.5 無(wú)菌吸管：1 ml（具0.01ml,刻度）、10 ml（具0.1 ml.刻度）。

• 2.6 無(wú)菌試管：18 mm × 180 mm。

• 2.7 旋渦混合器。

• 2.8 無(wú)菌平四：直徑 90 mm。

• 2.9 恒溫水浴箱：46°C士1°。

• 2.10 顯微鏡：10倍~100倍。

• 2.11 微量移液器及槍頭：1.0 ml。

• 2.12 折光儀。

• 2.13 郝氏計(jì)測(cè)玻片：具有標(biāo)準(zhǔn)計(jì)測(cè)室的特制玻片。

• 2.14 蓋玻片。

• 2.15 測(cè)微器：具標(biāo)準(zhǔn)刻度的玻片。

操作步驟

5.1 樣品的稀釋

5.1.1 固體和半固體樣品：稱取25g樣品，加人 225 ml. 無(wú)菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液），充分振搖，或用拍擊式均質(zhì)器拍打 1min~2min,制成1：10的樣品勻液。

5.1.2 液體樣品：以無(wú)菌吸管吸取25mL 樣品至盛有225 mL 無(wú)菌稀釋液(蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液)的適宜容器內(nèi)(可在瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú)菌玻璃珠)或無(wú)菌均質(zhì)袋中，充分振搖或用拍擊式

均質(zhì)器拍打 1 min~2 min.制成1：10的樣品勻液。

5.1.3 取1ml1：10樣品勻液注人含有9 mL 無(wú)菌稀釋液的試管中,另?yè)Q一支1mL 無(wú)菌吸管反復(fù)吹吸，或在旋渦混合器上混勻，此液為 工：100 的樣品勻液。

5.1.4 按5.1.3操作,制備 10 倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1支1ml 無(wú)菌吸管。

5.1.5 根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇2個(gè)～3個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液)，在進(jìn)行10倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1ml 樣品勻液于2個(gè)無(wú)菌平四內(nèi)。同時(shí)分別取1 ml

無(wú)菌稀釋液加人2個(gè)無(wú)菌平皿作空白對(duì)照。

5.1.6 及時(shí)將20 mL~25ml- 冷卻至46°C 的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂（可放置于 46°士

1°C恒溫水浴箱中保溫，傾注平四，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。置水平臺(tái)面待培養(yǎng)基基本凝固。

5.2 培養(yǎng)

瓊脂凝固后，正置平板，置28°C士1°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結(jié)果。

5.3 菌落計(jì)數(shù)

用肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡或低倍鏡，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母菌落數(shù)。以菌落形成單位(colony-forming units, CFU)表示。

選取菌落數(shù)在 10 CFU~150 CFU 的平板,根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母。霉菌蔓延生長(zhǎng)覆

蓋整個(gè)平板的可記錄為菌落蔓延。

6結(jié)果與報(bào)告

6.1結(jié)果

6.1.1 計(jì)算同一稀釋度的兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

6.1.2 若有兩個(gè)稀釋度平板上菌落數(shù)均在 10 CFU~150 CFU 之間，則按照GB 4789.2的相應(yīng)規(guī)定進(jìn)行計(jì)算。

6.1.3 若所有平板上菌落數(shù)均大于 150 CFU，則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可記錄為多

不可計(jì),結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。

6.1.4 若所有平板上菌落數(shù)均小于 10 CFU,則應(yīng)按稀釋度的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

6.1.5 若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于 1乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

6.1.6 若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在 10 CFU~150 CFU 之間,其中一部分小于 10 CFU 或大于

150 CFU 時(shí)，則以 10 CFU 或 150 CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。

6.2 報(bào)告

6.2.1 菌落數(shù)按“四舍五人”原則修約。菌落數(shù)在 10以內(nèi)時(shí)，采用一位有效數(shù)字報(bào)告;菌落數(shù)在 10~

100 之間時(shí),采用兩位有效數(shù)宇報(bào)告。

6.2.2 菌落數(shù)大于或等于 100 時(shí),前第了位數(shù)字采用“四舍五人”原則修約后，取前2位數(shù)字,后面用。

代替位數(shù)來表示結(jié)果;也可用10 的指數(shù)形式來表示,此時(shí)也按“四舍五人”原則修約,采用兩位有效數(shù)字。

6.2.3 若空白對(duì)照平板上有菌落出現(xiàn),則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。

6.2.4 稱重取樣以CFU/g 為單位報(bào)告,體積取樣以 CFU/mL 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或

酵母數(shù)。

• ZSH-150F生化培養(yǎng)箱

  前處理設(shè)備在線詢價(jià)