小鼠流感模型構(gòu)建
- 公司名稱 上海達(dá)為科生物科技有限公司
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- 更新時間 2025/7/9 10:16:28
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制作動物模型 細(xì)胞培養(yǎng) 分子生物學(xué)檢測 病理學(xué)形態(tài)檢測 蛋白質(zhì)技術(shù) 免疫學(xué)檢測 提供培訓(xùn)服務(wù)各種檢驗儀器設(shè)備、玻璃儀器及器具、一次性耗材等
一、模型建立核心要素
（一）病毒毒株與適應(yīng)株
常用毒株：
H1N1 PR8（A/Puerto Rico/8/34）：標(biāo)準(zhǔn)實驗室株，致病性穩(wěn)定，廣泛用于基礎(chǔ)研究。
H9N2（A/swine/Jiangsu/C1/08）與 H1N1 SD731（A/swine/Shandong/731/2009）：用于模擬亞型特異性感染。
新甲型H1N1：需通過鼠肺傳代獲得適應(yīng)株（如SC/09），提高小鼠致死率。
病毒制備：
擴(kuò)增：病毒接種9-11日齡SPF雞胚，收獲尿囊液分裝保存（-80℃）。
滴度：感染劑量通常為 1×10? TCID??/50μL 或 250 PFU（鼻內(nèi)接種）.
（二）感染途徑與方法
| 感染方式 | 操作要點 | 適用場景 |
|---|---|---|
| 鼻內(nèi)接種 | 麻醉小鼠后滴鼻接種病毒懸液（50μL） | 操作簡單，模擬上呼吸道感染 |
| 氣霧攻擊 | 霧化H1N1 FM1/PR8病毒，小鼠吸入感染 | 更接近自然感染，但需專用設(shè)備 |
| 顱內(nèi)注射 | 注射病毒至耳根與眼角連線處（0.03mL, TCID??=10?3） | 神經(jīng)系統(tǒng)感染研究（如腦炎） |
| 雙重感染模型 | 先接種流感病毒（H3N2），3天后感染HSV-1，檢測細(xì)胞因子與免疫細(xì)胞變化 | 研究病毒共感染機(jī)制 |
關(guān)鍵參數(shù)：
麻醉推薦異氟醚（安全可控）或干冰（快速）。
氣霧感染需控制霧化顆粒直徑（1-5μm）以深入肺泡。
（三）動物品系選擇
| 品系 | 病毒敏感性 | 病理特征 |
|---|---|---|
| BALB/c | 中高度敏感，H1N1感染后肺損傷顯著 | 炎癥因子（IL-6、TNF-α）升高明顯 |
| C57BL/6 | 對H3N2抵抗較強(qiáng)，H1N1易感性中等 | 適合免疫機(jī)制研究（T細(xì)胞應(yīng)答） |
| DBA/2J | 高敏感性（尤其H1N1），體重減輕顯著、死亡率高 | 強(qiáng)細(xì)胞因子風(fēng)暴，肺病理損傷更重 |
| ICR | 廣譜易感，氣霧感染后肺指數(shù)升高快 | 適合急性感染病理觀察 |
注：
雌性BALB/c小鼠更常用（體重15-20g，SPF級）。
DBA/2J品系可增強(qiáng)發(fā)病癥狀，但需注意高死亡率風(fēng)險。
二、疾病進(jìn)程與評估指標(biāo)
（一）臨床監(jiān)測
生存指標(biāo)：
體重下降：感染后3天開始下降，>20%需人道終點處理。
存活率：重度模型（如PR8）感染后7天死亡率可達(dá)80%。
行為評分：
活動減少、扎堆蜷縮、呼吸急促、毛發(fā)脫落。
體溫變化：
非發(fā)熱模型：核心體溫下降（與人類發(fā)熱相反）。
濕熱證模型：高脂飼料+熱應(yīng)激后肛溫升高（表1）：
| 組別 | 肛溫（℃） |
|---|---|
| 正常組 | 36.8±0.3 |
| 病毒組 | 35.2±0.4a |
| 模型組 | 37.5±0.6ab |
（二）器官損傷評估
肺指數(shù)（核心指標(biāo)）：
公式：肺指數(shù) = 肺濕重（g）/ 體重（g） × 100。
陽性標(biāo)準(zhǔn)：感染組肺指數(shù)顯著高于對照組（P<0.05）。
肺病理分級：
+：炎細(xì)胞浸潤，毛細(xì)血管充血；
++：肺泡滲出物增多，部分實變；
+++：肺組織大面積實變。
多器官指標(biāo)：
肝損傷：ALT/AST升高。
腎損傷：血肌酐（Cre）≥2倍基礎(chǔ)值。
（三）分子與免疫檢測
| 檢測類別 | 指標(biāo) | 技術(shù)方法 |
|---|---|---|
| 病毒載量 | 肺勻漿病毒滴度、RT-qPCR檢測病毒RNA | 細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、空斑試驗 |
| 炎癥因子 | IL-6、TNF-α、IFN-γ | ELISA（血清/肺泡灌洗液） |
| 免疫細(xì)胞變化 | NK細(xì)胞、T細(xì)胞亞群（CD4?/CD8?）、樹突狀細(xì)胞 | 流式細(xì)胞術(shù) |
| 血氧與組織缺氧 | 血氧飽和度（SpO?） | MouseOx Plus脈搏xue氧儀 |
動態(tài)監(jiān)測：
炎癥峰值：感染后12-24h（IL-6、TNF-α）。
器官衰竭期：24-48h（肺實變、血氧驟降）
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