使用POSITISIL® ODS-BP ( 4.6*250mm ，5µm)色谱柱，参照《中国药典》（2020年版）高效液相色谱法对附子的含量测定，检测苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱，可满足实验要求。

对照品溶液的制备  取苯甲酰新乌头原碱对照品、苯甲酰乌头原碱对照品、苯甲酰次乌头原碱对照品适量，精密称定，加异丙醇-二氯甲烷（1:1）混合溶液制成每1ml各含10μg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备  取本品粉末（过三号筛）约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氨试液3ml，精密加入异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液50ml，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz，水温在25℃以下）30分钟，放冷，再称定重量，用异丙醇-乙酸乙酯（1:1）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25ml，40℃以下减压回收溶剂至干，残渣精密加入异丙醇-二氯甲烷（1:1）混合溶液3ml溶解，滤过，取续滤液，即得。

色谱条件  

色谱柱  POSITISIL® ODS-BP ( 4.6*250mm ，5µm)

流动相  乙腈-四氢呋喃（25:15）为流动相A，以0.1mol/L醋酸铵溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱