C212小鼠成肌細胞

C212小鼠成肌細胞

特點:

1)特異性強:只對細胞進行有效識別和殺滅,而不傷害正常組織和細胞;抗瘤譜廣。

2)對體內各種細胞均能有效。

3)安全性好,除可能出現的發(fā)熱、少量出血外,無其他不良反應。

培養(yǎng)步驟

1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mLwan全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的wan全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,wan全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

2、對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法三:可選擇半數換液方式,棄半數培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

1)細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。棄培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細胞變圓脫落后,進行離心收集,1000RPM條件下離心8-10分鐘,去除上清,按凍存數量加入血清及DMSO,凍存比例為90%FBS+10%DMSO

PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右wan全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。