1原理：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，1894年*合成用来检测种子的生存能力，1958年开始用来染色检测哺乳动物组织的缺血梗塞。它是呼吸链中吡啶—核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。
2 取脑：可麻醉后直接取脑或经生理盐水灌注后取脑。因为脑组织未用多聚甲醛固定，所以较软，取脑时更应仔细，保持大脑的完整性。
3 －20度冰箱中速冻20分钟左右，便于切片。
4 切片：一般切成5－6片，每隔2mm切一片。第*刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。（参考：张均田，主编.现代药理试验方法）。如果需计算面积的话，应切得均匀或用专门的脑槽。
5将切片置于TTC中，常规浓度为2%，也有用1%或更低浓度的。
6用锡箔纸盖住后，放入37C温箱15～30min，不时翻动脑片，使均匀接触到染色液。也可以用将脑片放入多孔板，再滴入TTC，覆以圆形盖玻片使均匀染色。
7 染色后效果：为皮层下梗死。