一、實(shí)驗(yàn)原理

通過機(jī)械劃痕在單層腫瘤細(xì)胞上制造無細(xì)胞區(qū)域，觀察邊緣細(xì)胞向空白區(qū)遷移的能力，模擬體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移過程
。

二、關(guān)鍵步驟

1. ?細(xì)胞鋪板?

• 使用6孔板，接種密度為5×10?個(gè)細(xì)胞/孔（具體依細(xì)胞類型調(diào)整），過夜培養(yǎng)至90%融合度
  。

• 鋪板后輕拍培養(yǎng)板兩側(cè)（非四邊）使細(xì)胞分布均勻
  。

2. ?劃痕制作?

• 用滅菌200μL槍頭或牙簽垂直接觸板底，勻速劃出直線（可借助直尺對(duì)齊）
  。

• 每孔劃1-3道，劃痕寬度建議500μm（Culture Insert法可標(biāo)準(zhǔn)化寬度）
  。

3. ?清洗與培養(yǎng)?

• PBS輕柔沖洗3次去除脫落細(xì)胞，換用含1-2% FBS的培養(yǎng)基抑制增殖干擾
  。

• 加入絲烈霉素（4μg/mL）可進(jìn)一步阻斷增殖，純化遷移效應(yīng)
  。

4. ?圖像采集與分析?

• ?時(shí)間點(diǎn)?：0h、12h、24h（依細(xì)胞遷移速度調(diào)整）
  。

• ?定位標(biāo)記?：提前用Marker筆在板底畫網(wǎng)格線確保同一視野
  。

• ?量化方法?：

• 遷移率 = (初始寬度 - 終點(diǎn)寬度) / 初始寬度 ×100%。

三、注意事項(xiàng)

1. ?細(xì)胞狀態(tài)?

• 選擇高活力（>95%）且低自發(fā)凋亡的腫瘤細(xì)胞系
  。

• 避免過度消化，吹打時(shí)使用含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)
  。

2. ?劃痕一致性?

• 槍頭需垂直板底，壓力均勻，多孔實(shí)驗(yàn)建議同一人操作
  。

• 預(yù)實(shí)驗(yàn)確定最佳劃痕寬度（過窄易愈合，過寬難遷移）
  。

3. ?干擾控制?

• 排除增殖影響：低血清培養(yǎng)基或絲裂烈素處理
  。

• 溫度穩(wěn)定：操作全程在37℃恒溫臺(tái)進(jìn)行，減少熱應(yīng)激

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