人抗神经/节苷脂抗体(GM1)试剂盒

工作原理

• 间接法：预先将人抗神经/节苷脂抗体（GM1）捕获抗原包被在微孔板上。加入标本、标准品以及 HRP 标记的检测抗体后，温育并洗涤。底物 TMB 在过氧化物酶催化下，先转化为蓝色，再在酸作用下变为最终的黄色。颜色深浅与样品中的人抗神经/节苷脂抗体（GM1）呈正相关，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），即可计算样品浓度。

• 双抗体夹心法：把抗 GM1 抗体包被于酶标板，样本中的 GM1 抗体与之结合形成固相抗原复合物。随后加入生wu素化的抗 GM1 抗体，再加入 ABC 复合物与生物wu素抗体结合，形成免疫复合物。加入 TMB 显色底物，显色情况与样本中 GM1 抗体含量成正比，同样借助酶标仪测定 OD 值来定量或定性分析抗体含量。

试剂盒构成

• 微孔酶标板：已包被抗体或抗原，为抗原抗体反应提供场所，如 96 孔配置为 12 孔 ×8 条，48 孔配置为 12 孔 ×4 条。

• 标准品：通常有 6 管，浓度依次为特定梯度，如 80、40、20、10、5、2.5 ng/mL ，用于绘制标准曲线。

• 样本xi释液：用于稀释样本，确保样本浓度处于试剂盒可检测范围内，不同规格试剂盒的体积有所差异，如 96 孔配置为 6mL，48 孔配置为 3mL。

• 检测抗体 - HRP：与样本中的抗体或抗原结合，催化底物显色，96 孔配置为 10mL，48 孔配置为 5mL。

• 洗涤缓冲液：一般为 20× 浓缩液，使用时需按 1：20 用蒸馏水稀释，如 96 孔配置的 25mL 浓缩液，可稀释出 500mL 洗涤液，用于洗去未结合的物质，减少非特异性反应。

• 底物 A、B：两者混合后在酶的作用下发生显色反应，不同规格试剂盒中两者的体积一般相同，如 96 孔和 48 孔配置中，底物 A、B 均为 6mL 和 3mL。

• 终止液：用于终止显色反应，保证检测结果的准确性，体积与底物 A、B 对应，如 96 孔配置为 6mL，48 孔配置为 3mL。

• 封板膜、说明书、自封袋：封板膜用于在温育过程中防止液体蒸发和外界污染，一般有 2 张；说明书详细介绍试剂盒的使用方法、注意事项、检测原理等；自封袋用于保存未使用完的试剂盒组件。

样本要求

• 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置 2 小时或 4℃过夜，然后以 1000×g 离心 20 分钟，取上清。若暂时不检测，上清可置于 -20℃或 -80℃保存，但要避免反复冻融。

• 血浆：使用 EDTA 或肝素作为抗凝剂采集标本，采集后的 30 分钟内，于 2 - 8℃以 1000×g 离心 15 分钟，取上清检测。保存条件与血清相同。

• 组织匀浆：用预冷的 PBS (0.01M, pH = 7.4) 冲洗组织，去除残留血液，称重后剪碎。按 1:9（一般比例）的重量体积比，将剪碎的组织与 PBS 加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨?；箍赏ü扑榛蚍锤炊橙诮徊搅呀庾橹赴?，最后以 5000×g 离心 5 - 10 分钟，取上清检测。

• 细胞培养物上清或其它生物标本：以 1000×g 离心 20 分钟，取上清检测。保存方式与血清一致。需注意，标本溶血会影响检测结果，溶血标本不宜用于此项检测。

操作流程

1. 准备工作：从冷藏环境取出试剂盒后，在室温平衡后方可使用。按 1：20 用蒸馏水稀释 20× 洗涤缓冲液。准备好酶标仪（450nm 检测波长滤光片，570nm 或 630nm 校正波长滤光片）、高精度加样器及对应枪头、37℃恒温箱等器材。

2. 加样：从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加。

3. 温育与结合：除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。

4. 洗涤：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。

5. 显色：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

6. 终止与读数：每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。

性能特点

• 检测范围：一般在 2.5 ng/mL - 80 ng/mL，不同品牌试剂盒会有所差异，例如上海信裕生物科技有限公司的产品检测范围为 1.563 - 100mIU/ml。

• 灵敏度：多数试剂盒能检测到小于 0.1 ng/mL 的浓度，如上海仁捷生物科技有限公司的产品灵敏度可达此标准，上海信裕生物的产品最小可测人 Anti - Ganglioside M1 Antibody 达 0.938mU/ml。

• 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应，确保检测结果的准确性。

• 重复性：板内变异系数小于 10% ，板间变异系数小于 15% ，保证了不同批次实验结果的可靠性