土壤硝酸還原酶（S-NR）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：BC3100
規(guī)格：50T/24S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋/水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、30-50目篩、研缽、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干，過(guò)30~50目篩。
二、測(cè)定步驟

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至520nm，蒸餾水調(diào)零。

2. NaNO₂標(biāo)準(zhǔn)液的配制：用蒸餾水將標(biāo)準(zhǔn)品稀釋0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表：

備注：實(shí)驗(yàn)中每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管需100µL標(biāo)準(zhǔn)溶液

1. 樣本測(cè)定：

混勻，顯色20min后，520nm下讀取各管吸光值，分別記為A測(cè)定、A對(duì)照、A標(biāo)準(zhǔn)、A空白。計(jì)算ΔA測(cè)定=A測(cè)定- A對(duì)照，ΔA標(biāo)準(zhǔn)=A標(biāo)準(zhǔn)-A空白。每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和空白管只需檢測(cè)1-2次。
三、S-NR活性計(jì)算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制：
以0.8、0.6、0.4、0.2、0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液為橫坐標(biāo)（x軸），ΔA標(biāo)準(zhǔn)為縱坐標(biāo)（y軸）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得到線(xiàn)性回歸方程y=kx+b，將ΔA測(cè)定代入方程得到x（μmol/mL）。
2、S-NR活性計(jì)算：
單位的定義：每g土樣每天中產(chǎn)生1μmol NO₂ˉ的量為一個(gè) S-NR活力單位。
S-NR（U/g 質(zhì)量）=x×V標(biāo)準(zhǔn)÷W÷T=0.1x÷W
V標(biāo)準(zhǔn)：反應(yīng)體系中加入的標(biāo)準(zhǔn)液體積，0.1mL；W：風(fēng)干土樣，g；T：反應(yīng)時(shí)間，1d。
注意事項(xiàng)：

1. 試劑一、試劑二和試劑四在冰上放置，用不完的試劑-20℃分裝保存，避免反復(fù)凍融。

2. ΔA測(cè)定過(guò)小（小于0.01），可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（37℃水浴時(shí)間）。

3. 當(dāng)ΔA大于1時(shí)，可以將上清液用蒸餾水稀釋后，再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

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