(R)-BiAC法（手性氨基酸LC/MS分析）
D/L-氨基酸（手性氨基酸）LC/MS 分析用衍生试剂
氨基酸是广泛存在于生物体内和自然界中的化合物。它存在着两种对映异构体，即L-氨基酸和D-氨基酸，主要以L-氨基酸的形式存在。近年研究表明，微量存在的D-氨基酸与记忆、学习能力等方面有关1），因此D-氨基酸与L-氨基酸的分离分析变得越发重要。
（R）-BiAC是一种衍生化试剂，可用于柱前衍生化法对D/L-氨基酸（手性氨基酸）进行LC/MS分析。使用(R)-BiAC试剂时无需专用设备即可进行用时短（19 min）、分辨率高的手性氨基酸分析。
1）Hashimoto, A., Oka, T.: Prog. Neurobiol., 52, 325 (1997).
◆特点
无需专用设备，即可使用LC/MS检测手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）！
使用（R）-BiAC进行柱前衍生化，无需专用设备，使用LC/MS即可检测手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。
约19 min即可实现20种D/L氨基酸的同时分析！
可短时间内同时分析多种手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。
可实现手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）的高灵敏度检测！
可提高MS的电离效率，还能以atto mol水平的灵敏度检测手性氨基酸（D-氨基酸、L-氨基酸）。
可提供衍生化专用试剂套装！
使用已制备的(R)-BiAC 衍生试剂套装即可更轻松地进行衍生化操作。
◆使用(R)-BiAC 衍生试剂套装的衍生化步骤
(R)-BiAC 衍生试剂套装组成
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 数量 |
293-86011 | (R)-BiAC用缓冲液 | 3 mL | 1 |
290-86021 | 反应终止剂 | 10 mL | 1 |
除（R)-BiAC 衍生试剂套装外所需试剂
产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
012-19851 | 乙腈 | LC/MS用 |
025-19761 | (R)-BiAC | 氨基酸分析用 |
235-64051 | Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D) | - |
试剂的制备方法
1、R)-BiAC试剂溶液
使用1-2 mL乙腈冲洗1整瓶（5 mg）(R)-BiAC，转移到其他容器后，加入乙腈使总体积达到5 mL，混合并充分溶解※
※ 将已制备的溶液按需分装后冷冻保存。需尽快使用（-20°C 下可存储约1周），并避免反复冻融。
2、(R)-BiAC用缓冲溶液—乙腈溶液
向(R)-BiAC用缓冲溶液的容器中添加3 mL的乙腈溶液
衍生化
◆人尿液中手性氨基酸的分析示例※
前处理条件
1、20 µL样品/标准溶液 + 20 µL内标溶液 + 40 µL乙腈
2、搅拌
3、离心（20,000 x g，10 min）
↓
收集上清液 20 µL
↓
衍生化
13种手性氨基酸的分析示例（色谱柱：Wakopak® Ultra APDS TAG®）
LC/MS/MS 色谱图 （标准溶液（D-氨基酸：5 μM L-氨基酸: 50 μM））
LC/MS/MS 色谱图（人尿液样品）
成分名 | 检测离子 (m/z) | 成分名 | 检测离子 (m/z) | 成分名 | 检测离子(m/z) | |||
母离子 | 子离子 | 母离子 | 子离子 | 母离子 | 子离子 | |||
D-Asn | 427 | 295.1 | L-Glu | 443 | 295.1 | L-Met | 445 | 295.1 |
L-Asn | 428 | 295.1 | D-allo-Thr | 414 | 295.1 | D-allo-Ile | 426 | 295.1 |
D-Gln | 441 | 295.1 | L-Thr | 415 | 295.1 | L-Ile | 427 | 295.1 |
L-Gln | 442 | 295.1 | D-Ala | 384.1 | 295.1 | D-Leu | 426 | 295.1 |
D-Ser | 400 | 295.1 | L-Ala | 385.1 | 295.1 | L-Leu | 427 | 295.1 |
L-Ser | 401 | 295.1 | D-Tyr | 476 | 295.1 | D-Phe | 460.1 | 295.1 |
Gly | 371 | 295.1 | L-Tyr | 477 | 295.1 | L-Phe | 461.1 | 295.1 |
D-Asp | 428.2 | 295.1 | D-Val | 412 | 295.1 | D-Trp | 499 | 295.1 |
L-Asp | 429.2 | 295.1 | L-Val | 413 | 295.1 | L-Trp | 500 | 295.1 |
D-Glu | 442 | 295.1 | D-Met | 444 | 295.1 | |||
【设备】
Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500
【HPLC】
色谱柱：Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)
柱温：40℃
流动相：A) 0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq., B) 95% CH3CN in H2O
梯度：
| Time (min.) | B conc. (%) |
| 0-3 | 14-16 |
| 3-14.3 | 16-33 |
| 14.3-17 | 33-45 |
| 17-17.1 | 45-90 |
| 17.1-18 | 90 |
| 18-18.1 | 90-14 |
| 18.1-20 | 14 |
【MS】
电离：ESI
模式：SRM
◆乳酸饮料中手性氨基酸的分析示例※
前处理条件
1、20 µL样品/标准溶液 + 20 µL内标溶液 + 40 µL乙腈
2、搅拌
3、离心（20,000 x g，10 min）
↓
收集上清液 20 µL
↓
衍生化
13种手性氨基酸的分析示例（色谱柱：Wakopak® Ultra APDS TAG®）
LC/MS/MS 色谱图 （标准溶液（D-氨基酸：5 μM L-氨基酸: 50 μM））
LC/MS/MS 色谱图（乳酸菌饮料样品）
| 成分名 | 检测离子 (m/z) | 成分名 | 检测离子 (m/z) | 成分名 | 检测离子(m/z) | |||
| 母离子 | 子离子 | 母离子 | 子离子 | 母离子 | 子离子 | |||
| D-Asn | 427 | 295.1 | L-Glu | 443 | 295.1 | L-Met | 445 | 295.1 |
| L-Asn | 428 | 295.1 | D-allo-Thr | 414 | 295.1 | D-allo-Ile | 426 | 295.1 |
| D-Gln | 441 | 295.1 | L-Thr | 415 | 295.1 | L-Ile | 427 | 295.1 |
| L-Gln | 442 | 295.1 | D-Ala | 384.1 | 295.1 | D-Leu | 426 | 295.1 |
| D-Ser | 400 | 295.1 | L-Ala | 385.1 | 295.1 | L-Leu | 427 | 295.1 |
| L-Ser | 401 | 295.1 | D-Tyr | 476 | 295.1 | D-Phe | 460.1 | 295.1 |
| Gly | 371 | 295.1 | L-Tyr | 477 | 295.1 | L-Phe | 461.1 | 295.1 |
| D-Asp | 428.2 | 295.1 | D-Val | 412 | 295.1 | D-Trp | 499 | 295.1 |
| L-Asp | 429.2 | 295.1 | L-Val | 413 | 295.1 | L-Trp | 500 | 295.1 |
| D-Glu | 442 | 295.1 | D-Met | 444 | 295.1 | |||
【设备】
Shimadzu Nexera X2 HPLC System / Sciex Triple QuadTM 6500
【HPLC】
色谱柱：Wakopak® Ultra APDS TAG® φ2.1 mm × 100 mm (D)
柱温：40℃
流动相：A）0.1% HCOOH in 10 mM HCOONH3 aq.，B） 95% CH3CN in H2O
梯度：
Time (min.) | B conc. (%) |
0-3 | 14-16 |
3-14.3 | 16-33 |
14.3-17 | 33-45 |
17-17.1 | 45-90 |
17.1-18 | 90 |
18-18.1 | 90-14 |
18.1-20 | 14 |
【MS】
电离：ESI
模式：SRM
※ 本数据为分析示例，离子源参数和其他参数可能因所用设备而异。
◆产品列表
衍生化试剂
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 025-19761 | (R)-BiAC | 5 mg | 氨基酸分析用 |
| 296-86001 | (R)-BiAC衍生化试剂套装 | 1 kit | 氨基酸分析用 |
| 012-19851 | Acetonitrile 乙腈 | 1 L | LC/MS用 |
| 018-19853 | 3 L | LC/MS用 |
HPLC色谱柱
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 |
| 235-64051 | Wakopak(R) Ultra APDS TAG(R) φ2.1mm × 100mm (D) | 1 EA |
标准溶液
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 015-27891 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN[CRM] 氨基酸混合标准溶液, AN型 [CRM] | 1 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 011-27871 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B[CRM] 氨基酸混合标准溶液, B型 [CRM] | 1 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 018-27881 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H[CRM] 氨基酸混合标准溶液, H型 [CRM] | 1 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 017-27851 | APDSTAG（R） Wako Amino Acids Mixture Standard Solution No1[CRM] APDS Tag® Wako用 氨基酸混合标准溶液No1[CRM] | 2 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 014-27861 | APDSTAG（R） Wako Amino Acids Mixture Standard Solution No.2[CRM] APDS Tag® Wako用 氨基酸混合标准溶液No.2[CRM] | 2 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 016-28161 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN(High Range) 氨基酸混合标准溶液，AN型（高浓度） | 1 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 010-28164 | 5 mL | 氨基酸自动分析用 | |
| 012-28141 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B(High Range) 氨基酸混合标准溶液，B型（高浓度） | 1 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 016-28144 | 5 mL | 氨基酸自动分析用 | |
| 019-28151 | Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H(High Range) 氨基酸混合标准溶液，H型（高浓度） | 1 mL×5A | 氨基酸自动分析用 |
| 013-28154 | 5 mL | 氨基酸自动分析用 |
内标混合液
| 产品编号 | 产品名称 | 产品规格 | 产品等级 |
| 293-73701 | APDSTAG（R） Wako Amino Acids Internal Standard Mixture Solution APDS Tag® Wako用氨基酸内标混合溶液No1[CRM] | 1 set | 氨基酸自动分析用 |
参考文献
1）Harada, M. and Karakawa, S. et al.: J. Chromatogr. A, 1593, 91 (2019).
2）Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Wako Junyaku Jiho, 87 (1), 5 (2019).
3）Harada, M. and Karakawa, S. et. al.: Symmetry, 12, 913 (2020).
关于富士胶片和光
日本富士胶片和光纯药株式会社（FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation）供应产品超过5万种，涵盖合成与材料、分析、培养、生命科学、药品生产与品质管理等应用，囊括了基础研究至关乎人类健康的生命科学研究领域。本社成立于1922年，前身为前武田药品工业株式会社，2017年被富士胶片集团全面收购。
随着富士胶片集团对生命科学领域的更大重视和投入，为了继续对中国客户提供更多前沿、品质可靠的产品，富士胶片和光纯药株式会社在中国设立了子公司富士胶片和光（广州）贸易有限公司，是一家试剂、耗材和仪器的综合供应商。除了富士胶片和光品牌产品，本公司还代理Enzo Life Sciences、VLVbio、imed、AdipoGen、Stemgent、Cosmo Bio、ReproCell、Funakoshi、Kikkoman、Sanplatec、SONSAN、Genovis、Albumedix、Indigo等国内外品牌，在学术研究、产业化、医疗等大范围领域作出贡献。
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