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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

單細(xì)胞是非常重要的實(shí)驗(yàn)材料，但是由于單細(xì)胞中的 RNA 很少，一個(gè)人體細(xì)胞只有 6 pg 的基因組 DNA，一個(gè)小鼠胚胎干細(xì)胞只有 2 萬(wàn)多個(gè)mRNA 分子，一個(gè)小鼠成纖維細(xì)胞只有 50 萬(wàn)個(gè) mRNA 分子。因此單個(gè)細(xì)胞根本沒(méi)法用來(lái)進(jìn)行核酸純化。為了克服次缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了單細(xì)胞RT-PCR 試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.直接用 1-500 個(gè)細(xì)胞進(jìn)行 RT-PCR，免去 RNA 純化過(guò)程中不可避免的

RNA 丟失。

2.本產(chǎn)品采用 RT 和 PCR 分離的兩步法設(shè)置，方便用戶用珍貴的 cDNA

樣本進(jìn)行更多靶基因的PCR 檢測(cè)。

3.所含 RNA 保護(hù)劑可有效抑制 RNA 的降解。

4.所含保護(hù)劑能有效克服痕量 RNA 因非特異性吸附產(chǎn)品的丟失。

5.RT 所得的 cDNA 可以用戶后續(xù)染料法PCR 和探針?lè)?PCR 檢測(cè)。本產(chǎn)品只包括染料法PCR 試劑。

6.本產(chǎn)品足夠進(jìn)行 200 次 5 μL 體系的單細(xì)胞裂解、200 次 10 μL 體系的逆轉(zhuǎn)錄、200 次 10 μL 體系的染料法 qPCR 實(shí)驗(yàn)。

7.單細(xì)胞 RT-PCR 試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

單細(xì)胞裂解液（RNA 專用）1 mL1.5 mL 白蓋管

5×單細(xì)胞 RT Buffer A400 μL0.5 mL 藍(lán)蓋管

5×單細(xì)胞 RT Buffer B400 μL0.5 mL 綠蓋管

單細(xì)胞專用 MMLV100 μL0.5 mL 紅蓋管

2×染料法 qPCR MasterMix1 mL1.5 mL 本色蓋

使用手冊(cè)1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

制備單細(xì)胞所需試劑，靶基因?qū)Ｒ坏?PCR 引物（不能擴(kuò)增基因組 DNA）

使用方法：

1.用戶需要根據(jù)樣本細(xì)胞種類選用合適的方法（如胰-酶消化）制備單細(xì)胞懸液，對(duì)已經(jīng)處于單細(xì)胞懸浮狀態(tài)的細(xì)胞（如卵細(xì)胞），則可以跳過(guò)此步。本試劑盒不含相關(guān)試劑。

2.將 5μL 單細(xì)胞裂解液（RNA 專用）預(yù)先分裝到 0.2 mL PCR 管中或 96孔板中，分裝的管數(shù)根據(jù)樣品數(shù)決定。

3.用流式細(xì)胞儀或在倒置顯微鏡下用液壓顯微操作器將 1-500 個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到上步所得的、預(yù)裝了裂解液的PCR 管或 96 孔板中。

4.細(xì)胞進(jìn)入裂解液后，裂解即發(fā)生。細(xì)胞裂解后在常溫最多只能放 5 小時(shí)。如果不需要立即使用，必須將樣品放-80℃長(zhǎng)期保存。細(xì)胞裂解液可以 反復(fù)凍融最多 5 次。

5.如果立即使用，則在裂解樣品中加入 2 μL 5×單細(xì)胞 RT Buffer A。

6.65℃保溫 5 分鐘后立即放冰上。

7.加入 2 μL 5×單細(xì)胞 RT Buffer B。

8.加入 1 μL 單細(xì)胞專用MMLV，輕柔吹打混勻，總體積為 10 μL。

9.在 PCR 儀上按下列參數(shù)進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)：25℃保溫 5 分鐘，50℃保溫

60 分鐘，55℃保溫 15 分鐘，70℃保溫 15 分鐘。

10.所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)PCR，也可以放-20℃長(zhǎng)期保存。

11.加入 50 μL 自備超純水到 10 μL cDNA 中稀釋 cDNA。

12.取 3 μL 上步所得 cDNA 稀釋液作為 PCR 模板，加入濃度為 4 μM 的自備PCR 引物各 1μL，加入 5 μL 2×染料法 PCR Mix，總體積為 10 μ L。

13.根據(jù)選定的 PCR 程序進(jìn)行染料法 qPCR 并進(jìn)行溶解曲線分析。

14.如果用戶需要用 cDNA 進(jìn)行探針?lè)≒CR 檢測(cè)，需要自備相關(guān)試劑。

選擇我們的單細(xì)胞 RT-PCR 試劑盒，就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案，為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航！