土壤无机磷（soil inorganic phosphorus，S-PHOS）含量试剂盒说明书

分光光度法 50 管/48 样

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：

磷是植物必需大量元素。植物主要通过根系从土壤中获取磷元素。土壤磷包括有机磷和无机磷。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷，才能进一步被植物吸收利用。

测定原理：

从土壤中提取无机磷，在酸性环境中，通过钼蓝法定磷，即可计算出无机磷含量。

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试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。临用前用蒸馏水稀释 10 倍后再用；

试剂三：粉剂×1 瓶， 4℃避光保存。临用前配制，加入 20 ml 蒸馏水，充分溶解后加入 10 ml 试剂二，混匀；

标准品：液体×1 支，20 μmol/L 无机磷标准液，4℃保存。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、1ml 玻璃比色皿、蒸馏水和 100 目筛子。

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取 10 ml 离心管，加入精确称取的 100 目筛子过筛的风干土样约 0.1g，加入 10 ml 提取液，震荡混匀，然后置于 40℃水浴浸提 1 h，8000g，25℃，离心 10min，取上清液，待测。

测定步骤：

1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2. 打开水浴锅，调节温度到 40℃。

3. 空白管：取EP 管，依次加入 500μl 蒸馏水，500μl 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为A 空白管。

4. 标准管：取EP 管，依次加入 50μl 标准液，450μl 蒸馏水，500μl 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为A 标准管。

5. 测定管：取EP 管，依次加入 50μl 上清液，450μl 蒸馏水，500μl 试剂三，混匀后置于 40℃水浴保温 10min，室温冷却 10 min 后于 660 nm 测定吸光度，记为A 测定管。

需在 40min 内完成比色。

土壤无机磷含量计算公式：

S-PHOS（nmol/d /g 干重）= [C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V 总÷W

= 200×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W

C 标准液：20 μ mol/L；V 总：总上清液体积，10 ml=0.01 L；W：土壤样品质量，g。

注意事项：

1、空白管和标准管只需测定一次。

2、试剂三需临用前配制，限当天使用。试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。

3、40min 内完成比色。

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