Script III RT MasterMix

( Perfect for qPCR )

Script III RT MasterMix 反转录试剂

目录号:71518

产品内容

保存条件

-20℃保存，有效期 12 个月。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介

Script III RT MasterMix为一管式逆转录预混液，含有逆转录所需的所有试剂：Script III Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、OligodT Primer、dNTP Mixture、RT Buffer。

只需加入RNA模板和RNase-Free H2O，15分钟即可完成逆转录反应。 操作方便快捷，逆转录产物兼容染料法和探针法qPCR，用于检测高拷贝或者低拷贝基因。

注意事项

1． 避免RNase污染。

2． 为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。

3． 5x RT MasterMix含有甘油比较粘稠，容易吸附在管壁和吸头外，导致损失，使用前请点甩离心后取用。5x RT MasterMix包含的酶过量，即使每次分别按照3.8 μl使用，也不影响使用效果。

4． 20 μl逆转录反应体系建议加入不超过1μg的Total RNA。如果目的基因的表达量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否则，RNA量过高，可能会超出后续qPCR的线性范围。

5． 本产品适用于包含Ploy (A)结构的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。

6． 如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5 min后迅速转移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混匀，50°C孵育15 min进行逆转录。

第一连 cDNA 合成 (以 20 μl 反应体系为例)

重要提示：操作前，请将各组分轻弹混匀，点甩离心后置冰上备用。

1． 反应体系的配制

于冰上，在PCR管中，加入以下组分：

2． 轻柔吸打混匀，42℃孵育15 min，进行逆转录反应。

3． 85°C加热5 sec，终止反应。

逆转录产物可立即用于qPCR反应，或保存于-20°C，并在半年内使用；长期存放，请分装后存于-70°C。

qPCR

建议取1~2μl cDNA产物原液作为20μl qPCR反应体系的模板。

如果基因表达量比较高，请根据实际情况适当稀释cDNA模板后使用。

相关产品：

71519 2x SYBR Green qPCR Mix (同TB Green Premix Ex Taq)

71600 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有qPCR仪)

91011 RNAzol Reagent（Trizol）

91013 通用型总RNA快速提取试剂盒（动物、植物、细菌、真菌、酵母）

91218 动物组织/细胞/昆虫总RNA提取试剂盒 (同RNeasy Plus Mini Kit)

91318 多糖多酚植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit的升级版)

91451 高效动物组织/细胞总RNA提取试剂盒 (动物组织、细胞)

91452 高效植物总RNA提取试剂盒（根、茎、叶、花）

Script III RT MasterMix 反转录试剂