FlashPure Blood Total RNA Mini Kit

超纯全血总 RNA 提取试剂盒（离心柱型）

超纯全血总RNA快速提取试剂盒

目录号：91215

产品内容

自备试剂

无水乙chun、β-巯基乙chun

保存条件

室温（15 ~ 25℃）下，存放 12 个月，不影响使用效果。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

产品简介

适用于快速提取新鲜血液的总RNA，RNA可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。

产品特点

1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全过程仅需 20 min！

操作步骤

提示：

①所有离心步骤均需要在室温（15 ~37℃）下进行。

②第一次使用前，请先在漂洗液 RW 和 70%乙chun中加入zhi定量无水乙chun。

③操作前，先用 RNase-Free H2O 将 10X 红细胞裂解液 RLB 稀释到 1X。

1. 在适合大小的 RNase free 离心管中加入 1 体积（0.5-1 ml）各种抗凝剂新鲜血液 (先颠倒混匀后)和 3 体积的红细胞裂解液 RLB，颠倒混匀，可轻弹管壁，确保混匀。

2. 室温放置 10 分钟（期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞）。

注意：如果 RNA 降解严重，可在冰上裂解，时间可以长一些以充分裂解。

3. 12,000 rpm 离心 20 秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清

（注意不要吸到管底的细胞团），留下完整的管底白细胞团。

注意：离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液，重悬后重复步骤 2，3。

注意：上清尽可能che底吸弃，残留过多会稀释裂解液，造成裂解异常，产量纯度降低。

4. 涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀wan全松散重悬，加入 1 ml 裂解液 RL，用移液枪反复吹打，充分裂解细胞。

5. 将匀浆样品剧烈震荡混匀，在室温（15 -30℃）条件下孵育 5 min，使得核酸蛋白复合物wan全分离。

6. 每1 ml裂解液 RL 加 0.2 ml lv仿，盖紧样品管盖，剧烈振荡 15 sec，并在室温下放置2min。

7. 12，000rpm 离心 10 min，样品会分成三层：下层有机相，中间层和上层无色的水相，RNA 存在于水相中。水相层的容量大约为所加 RL 体积的 60%，把水相转移到新管中，进行下一步操作。

8. 向水相中加入等体积 70%乙chun，吹打混匀。

9. 每次转移≤700 μl 水相混合物至一个 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 离心1 min，RNA 被吸附在膜上，弃滤液。重复此过程，直到溶液全部上柱。

10. 加500μl去蛋白液 RE，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。

11. 加入500μl漂洗液RW，13,000 rpm 离心 30 sec，弃滤液。

12. 重复步骤 11。

13. 将 RNA 吸附柱放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，che底除去膜上残留的乙chun。

14. 取出 RNA 吸附柱，放入一个新的 1.5 ml RNase - free 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加30-50μl RNase free H2O（事先在70-90℃水浴中加热可提高产量），室温放置1min，13,000 rpm 离心1 min，管底即是RNA溶液。

15. 提取的RNA可直接用于下游实验，或于-70℃保存，避免 RNA 降解。

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