诺博莱德 超氧阴离子含量检测试剂盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

超氧阴离子含量检测试剂盒 抗逆系列

产品货号：BC9078

产品名称：超氧阴离子含量检测试剂盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

产品规格：50T/48S

产品简介：

自备试剂：该试剂盒实验过程中需自备试剂，详情见网站说明书

中文名称：超氧阴离子含量检测试剂盒

英文名称：Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

规格：50T/48S

检测方法：可见分光光度法 Spectrophotometer

储存条件：Store at 2-8℃，6 months

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyder BC9078超氧阴离子含量检测试剂盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit

产品说明：

生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。

超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO₂，NO₂在对氨基苯磺酰胺和萘乙二胺盐酸盐的作用下，生成紫红色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根据A530值可以计算样本中O₂含量。

技术指标：

最di检出限：24x10μmol/mL

线性范围：4.8x104-0.125μmol/mL

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、天平、水浴锅、离心机、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、氯仿(>98%，AR)、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.组织：按照质量(g)：提取液体积(mL)为1：5~10的比例(建议称取约0.1g，加入1mL提取液)加入提取液，冰浴匀浆后，12000rpm，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.细胞/细菌：按照细胞/细菌数量(106个)：提取液体积(mL)为5~1：1的比例(建议5百万细胞/细菌加入1mL提取液)，冰浴超声波破碎细胞/细菌(功率200w，超声3秒，间隔10秒，总时间3min)：12000rpm,4C离心10min，取上清置冰上待测

3.血清/血浆等液体：直接测定。若有浑浊，离心后取上清使用。

二、测定步骤

1.分光光度计预热30min以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。

三、超氧阴离子含量计算公式

1. 按照样本质量计算：

超氧阴离子含量(μmol/g质量)2xΔA 测定÷(△A标准+C标准)xV提取÷W

=0.0625x△A 测定+△A标准+W

超氧阴离子产生速率(μmol/min/g质量)=2x△A测定+(△A标准+C标准)xV 提取÷W+T

=0.003125xΔA 测定÷△A标准+W

2.按照样本蛋白质浓度计算：

超氧阴离子含量(μmol/mg prot)=2xΔA 测定+(△A标准+C标准)xV样本+(V样本xCpr)

=0.0625x△A 测定-△A标准+Cpr

超氧阴离子产生速率(μmol/min/mg prot) = 2x△A测定+(△A标准+C标准)xV 样木÷ (V 样木xCpr) ÷T

=0.003125xΔA 测定÷ΔA标准+Cpr

3.按照液体样本体积计算：

超氧阴离子含量(μmol/mL) =2xΔA测定÷(△A标准+C标准)

=0.0625xΔA 测定+△A标准

超氧阴离子产生速率(μmol/min/mL) =2x△A 测定÷(△A标准+C标准)÷T

=0.003125x△A测定÷AA标准

4.

按照细胞/细菌数量计算：

超氧阴离子含量(μmol/10cell)=2xΔA 测定÷(△A标准+C标准)xV 提取÷N

=0.0625x△A 测定+△A标准÷N

超氧阴离子产生速率(μmol/min/106cell)=2xΔA 测定+(△A标准+C标准)xV提取+N+T

=0.003125x△A测定+△A标准+N

C标准：标准管的浓度，0.03125μmol/mL;V样本：参与反应样本体积，0.5mL：V提取：提取过程中加入的提取液体积，1mL;Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL：W：样本质量，g：N：细胞/细菌数量，以10⁶计：T：反应时间，20min;2：2分子的O₂反应生成1分子NO₂。

注意事项:

1、若 ΔA 测定<0.01，建议增大样本量或延长第一步反应时间后测定:若△a测定>1.2，建议稀释样本后进行测定，注意同步修改计算公式。

2、样本上清液制备好之后，立刻进行测定，请勿将样本进行长时间的低温保存，以免影响测定结果。

3、试剂四为有机试剂，建议每次吸取时更换吸头，由于该试剂有一定的毒性，操作时请做好防护措施。

超氧阴离子含量检测试剂盒 抗逆系列

产品订购信息：

BC9078超氧阴离子含量检测试剂盒 Superoxide Anion Activity Content Assay Kit 50T/48S