诺博莱德 DB3.1 感受态细胞

 DB3.1 感受态细胞   载体构建

产品货号：C9258

产品名称：DB3.1 感受态细胞

产品规格：20*100ul/10*100ul

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderC9258 DB3.1 感受态细胞的大肠杆菌DB3.1细胞含有gyrA462基因，对λ噬菌体的ccdB基因产物的毒性具有抵抗作用，特别适用于转化和扩增包含ccdB基因的质粒载体。使用pUC19质粒检测，转化效率可达107cfu/µg。

基因型:

F-gyrA462endA1Δ(sr1-recA)mcrBmrrhsdS20(rB-,mB-)supE44ara-14galK2lacY1proA2rpsL20(SmR )xyl-5λ-leumtl1

抗生素耐药性：细胞具有链mei素抗性。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。

2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。

3. 将离心管置于42℃水浴中放置60秒钟，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2分钟，该过程不要摇动离心管。

4. 向每个离心管中加入500μL无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃150rpm，摇床振荡培养60分钟，目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5. 无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的LB固体培养基平板上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体wan全吸收后，倒置平板，37℃培养 12-16 小时。

6. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。

注意事项：

1．感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2．实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3．转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4．转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5．为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到*低。

 DB3.1 感受态细胞   载体构建

产品订购信息

C9258 DB3.1 感受态细胞  20*100ul/10*100ul