诺博莱德 dam-/dcm-感受态细胞

dam-/dcm-感受态细胞   载体构建

产品货号：C9108

产品名称：dam-/dcm-感受态细胞

产品规格：20*100ul

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderC9108 dam-/dcm-感受态细胞是采用大肠杆菌dam-/dcm-菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞。dam-/dcm-菌株来源于大肠杆菌K12菌株，该菌株为dam和dcm甲基化酶失活突变型菌株，常用于质粒DNA的去dam和dcm甲基化处理，消除dam和dcm甲基化对酶切的影响。核酸内切酶 (endA1)基因的缺失有利于提高质粒DNA的产量和质量。甲基化酶的失活突变可能会导致质粒DNA在该菌株中会出现突变，不建议连接产物的转化实验，仅用于质粒转化。菌株还具有抗T1 噬菌体感染的特点。pUC19质粒检测转化效率>×106cfu/μgDNA。

基因型：ara-14 leuB6 fhuA31 lacY1 tsx78 glnV44 galK2 galT22mcrA dcm-6 hisG4 rfbD1 R(zgb210::Tn10)TetS endA1 rspL136 (StrR)dam13::Tn9 (CamR) xylA-5 mtl-1 thi-1 mcrB1 hsdR2

菌株抗性: 对氯mei素、链mei素有抗性；对氨苄青mei素、卡那mei素、壮观mei素和四环素敏感。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μL含有1-100ng的质粒DNA到细胞中，用手指bo打管底，轻轻混匀。

2. 冰水浴中静置30分钟。

3. 42℃热击60秒钟，不要晃动。

4. 冰水浴中静置2分钟。

5. 加入500μL 的室温SOC或LB培养基。

6. 置于37℃摇床中，150-200rpm震荡复苏培养60分钟。

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的LB平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养 12-18 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心30秒钟，弃掉上清，留100μL左右的液体，用200μL 吸头轻轻吹打散菌块，取10μL重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液 体来回划线。这个方法可以获得更大的单克隆菌落。此方法主要适用于质粒转化，连接产物转化最好用涂布法。）

（质?？焖僮街瑁航街?的时间缩短到5分钟，对于氨苄青mei素抗性的质粒，步骤4完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青mei素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。）

注意事项：

1．感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2．实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3．转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4．转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5．为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到*低。

dam-/dcm-感受态细胞   载体构建

产品订购信息

C9108 dam-/dcm-感受态细胞  20*100ul