诺博莱德  OverExpressC43(DE3)感受态细胞

OverExpressC43(DE3)感受态细胞 载体构建

产品货号：C9928

产品名称：OverExpressC43(DE3)感受态细胞

产品规格：10*100ul

产品简介：

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderC9928  OverExpressC43(DE3)感受态细胞适用于毒性蛋白的表达，来源于 OverExpressC41(DE3)菌株。OverExpress C41(DE3)是通过毒性蛋白在BL21(DE3)内过表达筛选实验得到的基因突变菌株,该菌株的基因突变降低了T7RNA聚合酶的酶活性，下调毒性蛋白的表达量使细胞存活。OverExpressC43(DE3)菌株是通过另一个毒性蛋白对OverExpress C41(DE3)菌株再次进行毒性耐受性实验获得的，OverExpress C43(DE3)菌株比 OverExpress C41(DE3)更加耐受毒性蛋白。OverExpress C43(DE3)菌株也可以表达常规蛋白，相同条件 下，蛋白表达量略低于BL21(DE3)菌株。OverExpressC43(DE3)菌株属于B菌株，lon和ompT蛋白酶缺陷型。OverExpressC43(DE3) 感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19 质粒检测转化效率可达1×107cfu/μgDNA。

基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-) gal dcm (DE3)

菌株抗性：对氨苄青mei素，卡那mei素，氯mei素和四环素敏感。

操作方法：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

（以氨苄青mei素抗性的 pET 质粒为例）

1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入1-5μl 含有1-100ng的质粒DNA 到细胞中，用手指bo打管底，轻轻混匀。

2. 冰水浴中放置30分钟，不要晃动。

3. 42℃热击60 秒钟，不要晃动。

4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。

5. 加入500μL的室温的SOC或LB培养基。

6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养60分钟。

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有氨苄青mie素抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养12-24 小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心30秒钟，弃掉上清，留 100μL左右的液体，用200μL 吸头轻轻吹打散菌块， 取10μL重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

注意事项：

1、感受态细胞应保存在-70℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2、实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3、转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4、转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5、为防止转化实验不成功，可以保留部分连接产物，以重新转化，将损失降到*低。

OverExpressC43(DE3)感受态细胞 载体构建

产品订购信息

C9928  OverExpressC43(DE3)感受态细胞  10*100ul