诺博莱德 OrigamiB(DE3)plysS 感受态细胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

OrigamiB(DE3)plysS 感受态细胞 载体构建

产品货号：C1508

产品名称：OrigamiB(DE3)plysS 感受态细胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

英文名称：OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell

产品规格：20*100ul

产品简介：

外观(性状)：干冰运输，单加10kg干冰费

储存条件：-70℃

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

NobleRyderC1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受态细OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell W3110(DE3)来源于K-12菌株，细菌的染色体DNA上整合了T7 RNA聚合酶(T7RNP)表达框原件，T7RNP位于lacUV5启动子下，可表达T7 RNA聚合酶。pET、pGEX、pMAL等原核表达载体可使用该菌株进行外源重组蛋白的表达。W3110(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒检测转化效率大于1×106 cfu/μg DNA。

操作步骤：  

1. 质粒转化步骤

1) 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入目的质粒到细胞中，用手指bo打管底，轻轻混匀；

2) 冰水浴中放置30分钟，不要晃动；

3) 42℃热击60秒钟，不要晃动；

4) 冰水浴中放置2分钟，不要晃动；

5) 加入500μl无菌的SOC或LB培养基；

6) 置于37℃摇床中，150-200rpm震荡复苏培养60分钟；

7) 取50-100μl 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，37℃培养12-16小时。

（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm离心30秒钟，弃掉上清，留100μl左右的液体，用200μl 吸头轻轻吹打散菌块，取10μl重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大的单克隆菌落。）

（质?？焖僮街瑁航街?的时间缩短到5分钟，对于氨苄青mei素抗性的质粒，步骤4完成后，可直接涂布或划线于含氨苄青mei素抗性的LB平板上。其它抗性的质粒仍需60分钟的复苏培养。）

2. 蛋白表达步骤

1) 挑取单菌落，接种到含5ml带抗生素的LB培养基中；

2) 37℃，200rpm震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）；

3) 加入IPTG到终浓度为0.4mM，37℃诱导2-4小时或16℃诱导过夜；

4) 诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总蛋白、上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）；

5) 大量表达时，可用10ml过夜培养物转接到1L培养基中，当培养到OD600=0.4-0.8时，加入终浓度为0.4mM的IPTG，37℃诱导2-4小时或16℃诱导过夜（不同蛋白表达的优良条件有所不同，需在实验中优化）。

注意事项：

1. 我司生产的生化试剂如无特殊标注，基本为非无菌包装，若用于细胞实验，请提前做好预处理。

2. 一旦配成溶液，请分装保存，避免反复冻融造成的产品失效。

3. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。

4. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

OrigamiB(DE3)plysS 感受态细胞 载体构建

产品订购信息

C1508 OrigamiB(DE3)plysS 感受态细胞OrigamiB(DE3)pLysS Competment Cell  20*100ul