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上海语纯生物科技有限公司
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具体成交价以合同协议为准
产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 1×10^6 |
|---|---|---|---|
| 货号 | BH0272 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药/生物制药 |
产品货号：BH0272
产品规格：1×10^6
本产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗。
产品介绍
U87MG人脑星形胶质母细胞瘤(STR鉴定）
细胞介绍
该细胞系由PontenJ等建立，源于恶性神经胶质瘤。裸鼠皮下接种可成瘤。
细胞特性
1） 来源：神经胶质瘤
2） 形态：上皮样，贴壁细胞
3） 含量：>1x106细胞数
4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装
5) 用途：仅供科研使用。
运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理：
1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的专用培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的专用培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备MEM培养基；优质胎牛血清，10%；2mM L-谷氨酰胺；NEAA 1% ；双抗，1%。
注意事项：培养细胞的过程中细胞会发生堆叠和松散贴壁的细胞团这是正常的。需要2-3天对细胞进行一次换液以保证细胞的正常生长。该细胞贴壁较慢，复苏细胞后48h 内尽量不要移动细胞让细胞达到优良的贴壁状态。生长过程中会悬浮细胞出现，在换液和传代过程中需要离心回收悬浮的细胞。丢弃悬浮的细胞会使细胞的密度变低，这个细胞在培养过程中不会达到100%的融合。细胞生长过密会引起贴壁的细胞变成悬浮的状态。明胶或多聚赖氨酸包被的培养瓶可以使细胞更好的贴壁。
2） 培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
二． 二．细胞处理：
1）冻存细胞的复苏：
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL专用培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，专用培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml专用培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。
该细胞轻微贴壁和悬浮培养的细胞，传代可以参考以下方法：
1. 收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的专用培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
注意事项：
1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。
U87MG人脑星形胶质母细胞瘤(STR鉴定）
