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上海语纯生物科技有限公司
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产品简介
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 10 ×100ul/100×100ul |
|---|---|---|---|
| 货号 | CC96402 | 应用领域 | 医疗卫生,化工,生物产业,制药/生物制药 |
产品货号：CC96402
产品规格：10 ×100ul/100×100ul
本产品仅供科学研究或进一步生产使用，不可用于临床诊断或治疗。
产品介绍
Y1HGold Chemically Competent Cell
产品简介
Y1HGold 菌株是 Clontech 公司开发的 GAL4-AbA 酵母单杂系统用菌株，MATα 型，可直接转化质
粒进行筛库试验。Transformation marker 为：ura3，leu2；报告基因为：AbAr。Y1HGold-GAL4-
AbA 酵母单杂系统需要两种质粒配套使用：pAbAi 和 pGADT7。质粒 pAbAi 的筛选标志为 URA，
用于表达 pBait-AbAi construct (1~3 个 bait DNA 序列重复串联后克隆到 pAbAi 中)；质粒 pGADT7
的筛选标志为 LEU，用于表达 AD(GAL4 C 端 768 ~ 881 位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。
GAL4-AbA 酵母单杂系统原理：Aureobasidin A (AbA)是一 种环酯肽抗生素，在低浓度 (0.1-0.2
µg/ml)下即可对酵母产生毒性?；蜃橹姓狭?nbsp;pBait-AbAi 的酵母菌株 (Bait-Reporter Yeast Strains)，
当猎物蛋白 (Prey)结合到诱饵序列 (Bait DNA)上，GAL4 AD 就会激活 AbAr 的表达，从而能够在含
有抗生素 AbA 的培养基上生长。AbAr 与营养缺陷报告基因相比具有更低背景的优点，可以降低酵
母单杂假阳性发生的概率。Y1HGold 感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存三个月，pGADT7
质 粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
产品组分
名称
规格
储存方式
Y1HGold Competent Cell
100 μl /支
-80℃（3 个月）
pGADT7 (control vector, 10 ng/μl)
10 μl
-80℃（12 个月）
Carrier DNA (10 μg/μl)
100 μl
-20℃（12 个月）
PEG/LiAC
5 ml
4℃（12 个月）
基因型： MATα, ura3-52, his3-200, ade2-101, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, met-, MEL1
使用方法：
● 操作方法
1. 取 100 µl 冰上融化的 Y1HGold 感受态细胞，依次加入预冷的目的质粒 2-5 µg，Carrier DNA(95-
100℃， 5min，快速冰浴，重复一次) 10 µl，PEG/LiAc 500 µl 并吸打几次混匀，30℃水浴 30 min
(15 min 时翻转 6-8 次 混匀)。
2. 42℃水浴 15 min (7.5 min 时翻转 6 - 8 次混匀)。
3. 5000 rpm 离心 40 s 弃上清，ddH2O 400 µl 重悬，离心 30 s 弃上清。
4. ddH2O 50 µl 重悬，涂板，29℃培养 48 - 96 h。
● 培养基配制
① YPDA (1L): Tryptone 20 g ，Yeast extract 10 g ，0.2% adenine 15 ml 补水到 950 ml，用盐酸调
pH 到 6.5； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高压灭菌； 待培养基温度降到 55℃时，加入
已过滤的 40% 葡萄糖 50 ml。
② SD medium (1L): Yeast Nitrogen base 6.7 g ，葡萄糖 20 g ，Dropout 适量（按说明书） 补水到 1L，
调 pH 至 5.8； Agar 20 g(for plates only) 121℃，15 min 高压灭菌。
③ 0.2% adenine (1L): Adenine 2 g,，补水到 1L；溶解后高压灭菌或 0.22 µm 滤膜过滤除菌。
注意事项
1. 感受态细胞最好在冰上融化。
2. 转化高浓度的质?？上嘤跎僮钪沼糜谕堪宓木俊?/span>
3. 同时转化 2 - 3 种质粒时可增加质粒的用量。
4. Y1HGold 酵母菌株对高温敏感，最适生长温度为 27 - 30℃；高于 31℃，生长速度和转化效率呈
指数下降。
5. 菌落变粉不是污染，是酵母细胞生长中一个常见现象。当细胞在平板培养几天后，平板上的
Adenine 被酵母消耗完毕，酵母试图通过自身代谢途径合成 Adenine 以供利用，然而，有些菌株的
ADE2 基因被破坏，Adenine 合成途径受阻；又由于其 ADE4,5,6,7,8 基因均正常，所以造成中间产
物 P-ribosylamino imidazole (AIR) 在细胞中积累而使菌落变为粉红色。
6. 酵母在缺陷培养基中生长速度比 YPDA 培养基慢，培养基中缺陷成分越多，生长越慢，以转化涂
板为例：涂 YPDA 平板 29℃，48 h 培养可见直径 1 mm 克??；涂 SD 单缺平板 29℃，48 - 60 h 培养
可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 双缺平板 29℃，60 - 80 h 培养可见直径 1 mm 克隆，涂 SD 三缺或四缺
平板平板 29℃，80 - 90h 培养可见直径 1 mm 克隆
Y1HGold Chemically Competent Cell
