LC-MS/MS蛋白全序列驗證檢測技術(shù)服務詳情介紹

隨著現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)的進步，序列分析已成為dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗類生物藥物分子以及膠原蛋白等醫(yī)療器械類產(chǎn)品的研發(fā)和質(zhì)量控制中的重要環(huán)節(jié)。dànbáizhì的全序列驗證分析扮演關(guān)鍵角色，能夠確認重組dànbáizhì多肽類生物制品的完整準確表達，確保產(chǎn)品質(zhì)量和有效性。

百泰派克生物科技BTP基于CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量認證體系，建立蛋白測序平臺，該平臺配備多臺N端序列分析儀、超高效液相色譜高分辨質(zhì)譜聯(lián)用、經(jīng)過多輪優(yōu)化的蛋白從頭測序算法平臺。結(jié)合優(yōu)良的分析設備和算法，BTP能夠?qū)ànbáizhì進行全序列驗證分析，確保dànbáizhì的完整性和準確性，以滿足您的研究和質(zhì)量控制需求。

液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS/MS）蛋白全序列驗證分析:

蛋白全序列驗證分析的一般流程是使用特異性蛋白酶對dànbáizhì分子進行酶解切割，酶解后的供試品是復雜的肽段組成的混合物，然后通過液質(zhì)聯(lián)用平臺對供試品進行質(zhì)譜分析。

首先，是對樣本進行前處理，即根據(jù)蛋白全長理論氨基酸序列結(jié)合質(zhì)譜級別蛋白酶酶切位點信息選擇至少五種蛋白酶對蛋白進行酶切，提高酶切效率，以便獲得更高的覆蓋度。實際實驗中可以從多種蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N等）中選擇合適的蛋白酶或者組合酶切的方式對靶蛋白進行酶切；其次，使用液質(zhì)聯(lián)用Nano-LC-MS/MS 平臺對酶切之后的肽段混合物進行分析，得到總離子流色譜圖和質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)；然后，以所測定蛋白的理論序列建立本地數(shù)據(jù)庫，通過zhuānyè分析軟件匹配并計算每一種酶切之后鑒定到的肽段；利用酶切位點之間的互補性對蛋白序列進行拼接，zuì終實現(xiàn)蛋白全序列驗證。

案例示意圖:

抗體輕鏈全序列驗證分析示意圖

一般流程：

1、使用多種蛋白酶組合酶切的方式對蛋白進行酶切，提高酶切效率，以便獲得蛋白每一個氨基酸的序列信息。

2、使用 Nano-LC-MS/MS 液質(zhì)聯(lián)用高分辨平臺對樣品進行分析。

3、將得到的質(zhì)核比信息與理論序列建立的數(shù)據(jù)庫進行比對。

4、拼接每種酶切方式鑒定到的肽段，得到蛋白是否完整正確表達的信息。

實驗儀器:

• 液相色譜儀（Easy-nLC1200）

• 電噴霧-組合型四級桿-Orbitrap 質(zhì)譜儀（Q Exactive™ HybridQuadrupole-Orbitrap™ Mass Spectrometer ）

應用:

• dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗、膠原蛋白等生物制品的氨基酸全序列驗證分析

• dànbáizhì翻譯后修飾和化學修飾分析

• dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗、膠原蛋白等生物制品的氨基酸序列突變分析

常見問題:

問題1：覆蓋度能反映什么問題呢？若覆蓋度不足100%該怎么處理？

回答：覆蓋度是指被測序到的序列占全序列大小的比率。反應了我們的測序結(jié)果對于我們蛋白的覆蓋情況，若覆蓋率為100%代表樣品經(jīng)酶解處理之后得到的序列與目標序列高度吻合，若覆蓋率不足100%，我們會審查dànbáizhì數(shù)據(jù)和序列，查看缺失多少序列以及哪些理論上的肽段未檢測到；根據(jù)實際結(jié)果判斷是否繼續(xù)使用現(xiàn)有方法和酶解處理，重新獲得肽遺失的位置，還是蛋白樣品本身發(fā)生了突變，需要進行從頭測序分析。

問題2：想要進行測序的dànbáizhì分子量較小，如何進行蛋白樣品制備？

回答：如果蛋白分子量比較小，可以使用濃度較高的SDS-PAGE膠將dànbáizhì進行分離，然后對蛋白膠進行考馬斯亮藍染色，再將與目的蛋白大小一致的蛋白條帶切割下來，切下來的蛋白膠條用于質(zhì)譜鑒定。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結(jié)果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭毎麑用嫔蠈Χ喾N指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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