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當(dāng)前位置:北京百泰派克生物科技有限公司>>檢測技術(shù)服務(wù)>>蛋白分析>> 如何確定N或C末端?檢測技術(shù)服務(wù)
產(chǎn)品型號
品 牌百泰派克
廠商性質(zhì)其他
所 在 地北京市
更新時(shí)間:2025-06-04 14:04:32瀏覽次數(shù):69次
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在dànbáizhì研究中,N端(氨基末端)和C端(羧基末端)的jīngquè定義是理解dànbáizhì結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)步驟。無論是進(jìn)行翻譯起始位點(diǎn)驗(yàn)證、信號肽識別、翻譯后修飾研究,還是構(gòu)建表達(dá)載體或開發(fā)靶向藥物,末端信息的正確注釋都至關(guān)重要。本文將系統(tǒng)解析N/C末端的生物學(xué)意義與實(shí)驗(yàn)鑒定策略,幫助科研人員設(shè)計(jì)更jīngzhǔn的研究方案。
一、為什么要鑒定N端或C端?
dànbáizhì的兩個(gè)末端往往承載重要的功能信息與調(diào)控信號,例如:
N端可能包含信號肽、定位序列或起始?xì)埢揎棧ㄈ缫阴;⒓柞;?/p>
C端常涉及泛素化識別序列、酶解位點(diǎn)或跨膜結(jié)構(gòu)域;
dànbáizhì的翻譯起始點(diǎn)與剪接變體差異,常常體現(xiàn)在N端;
某些蛋白活性依賴于N/C端的剪切或特定結(jié)構(gòu)構(gòu)象。
??準(zhǔn)確識別dànbáizhì的起始和終止位點(diǎn),是從序列注釋邁向功能解析的關(guān)鍵一步。
二、如何確定N端或C端?
1、質(zhì)譜法(Mass Spectrometry-Based Terminomics)
質(zhì)譜是目前靈敏度zuì高、通量zuì高、信息zuì豐富的末端鑒定技術(shù),已廣泛用于各類樣本的dànbáizhì起始/終止位點(diǎn)解析。
?? N端鑒定策略:
陽性選擇法(Positive Selection):利用化學(xué)標(biāo)記手段(如TMT、Dimethyl標(biāo)簽)特異性標(biāo)記天然N端,抑制中間肽段干擾;
陰性選擇法(Negative Selection):先封閉所有游離N端,酶解后僅釋放天然N端肽段供富集和鑒定。
?? C端鑒定策略:
相對復(fù)雜,通常采用羧基特異性標(biāo)記劑(如2-pyridinecarboxaldehyde)與特異性酶切(如Lys-C)結(jié)合,富集C端肽段;
也可通過質(zhì)譜數(shù)據(jù)中“無下游殘基"的肽段推斷終止位點(diǎn)。
2、Edman降解法(傳統(tǒng)手段)
Edman降解是化學(xué)方法逐個(gè)識別N端氨基酸的經(jīng)典技術(shù),適用于高純度蛋白樣品。但其操作復(fù)雜、通量低、不能用于Cduāncèxù,在復(fù)雜樣本和大規(guī)模分析中已被質(zhì)譜法替代。
3、生物信息學(xué)預(yù)測(輔助驗(yàn)證)
借助已有數(shù)據(jù)庫與算法(如SignalP、TopFIND、Gencode),可預(yù)測信號肽剪切位點(diǎn)、翻譯起始點(diǎn)或C端結(jié)構(gòu)域位置。但需注意:
預(yù)測工具只能作為參考,無法代替實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù);
建議結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行聯(lián)合注釋,以提高注釋準(zhǔn)確性與生物學(xué)解釋力。
三、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)
為了提升N/C端鑒定的準(zhǔn)確性與覆蓋率,建議在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中考慮以下因素:
樣本處理:避免末端降解,采用yìtàiméi預(yù)處理;
蛋白酶選擇:使用Lys-C、Glu-C等切割特異性強(qiáng)的酶,有助于末端肽段保留;
數(shù)據(jù)分析策略:構(gòu)建定制數(shù)據(jù)庫、啟用非典型起始位點(diǎn)搜索、整合翻譯后修飾位點(diǎn)信息;
富集策略匹配研究目標(biāo):根據(jù)項(xiàng)目重點(diǎn)選擇陽性/陰性選擇策略或不同修飾標(biāo)簽。
四、N/C端信息如何應(yīng)用于科研或產(chǎn)業(yè)?
翻譯起始位點(diǎn)確認(rèn):用于驗(yàn)證不同剪接體或可變起始密碼子;
信號肽與定位序列識別:支持膜蛋白、分泌蛋白功能研究;
藥物靶點(diǎn)設(shè)計(jì)與抗體修飾:確保修飾位點(diǎn)不干擾功能區(qū)域;
蛋白降解通路解析:識別泛素化、N-degron等末端信號結(jié)構(gòu);
重組蛋白表達(dá)驗(yàn)證:確認(rèn)表達(dá)產(chǎn)物是否完整、起止位點(diǎn)是否準(zhǔn)確。
確定dànbáizhì的N端與C端,不僅是基本結(jié)構(gòu)注釋的需求,更關(guān)乎功能解析、機(jī)制研究乃至臨床開發(fā)。選擇合適的實(shí)驗(yàn)策略、平臺能力與數(shù)據(jù)分析流程,將直接決定末端信息的解讀深度。作為zhuānyè的蛋白組學(xué)服務(wù)提供者,百泰派克生物科技結(jié)合豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)與高性能儀器平臺,致力于為科研人員提供高覆蓋、高精度的dànbáizhìN/Cduāncèxù服務(wù),加速科學(xué)問題的深入解析。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析,提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù),包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),對蛋白序列進(jìn)行分析。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;
2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;
3.質(zhì)譜分析靈敏度高,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,采用金屬元素標(biāo)記物(通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體)標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞,再用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.技術(shù)優(yōu)良,*技術(shù)空白
采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。
2.分析數(shù)量大,成本較低
單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,而流式質(zhì)譜技術(shù)一次(單樣本)就可分析至少10^5的細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高,且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。
3.應(yīng)用前景大
①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標(biāo)。
百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),MALDI TOF,高效色譜分離技術(shù),提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,建立了完備的質(zhì)量體系,數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,軟件審計(jì)追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。
1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù);
2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù);
3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等;
4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,滿足您一站式服務(wù)需求;
5.服務(wù)3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!
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