如何進(jìn)行高精度抗體測(cè)序？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

抗體測(cè)序（Antibody Sequencing）作為抗體藥研發(fā)和抗體表征的重要工具，近年來受到廣泛關(guān)注。尤其在CDMO委托生產(chǎn)、抗體人源化、zhuānlì布局與一致性分析等場(chǎng)景中，對(duì)抗體序列的準(zhǔn)確率、完整性和功能位點(diǎn)識(shí)別能力提出了更高要求。那么，如何實(shí)現(xiàn)高精度的抗體測(cè)序？測(cè)序中需要注意哪些關(guān)鍵步驟和技術(shù)細(xì)節(jié)？本文將全面解析抗體測(cè)序的基本原理、主流策略、技術(shù)難點(diǎn)與解決方案，助您掌握高質(zhì)量抗體測(cè)序的核心要點(diǎn)。

一、什么是抗體測(cè)序？為什么這么重要？

抗體測(cè)序，指的是通過實(shí)驗(yàn)手段解析抗體分子的氨基酸序列信息，尤其是其可變區(qū)（Variable region）中的CDR（互補(bǔ)決定區(qū)）序列。測(cè)序?qū)ο罂梢允羌兓贵w、雜交瘤表達(dá)產(chǎn)物、重組表達(dá)體系中的抗體，或者B細(xì)胞水平的天然抗體。

高精度抗體測(cè)序?qū)τ谝韵氯蝿?wù)至關(guān)重要：

• 抗體藥物開發(fā)：構(gòu)建表達(dá)系統(tǒng)、優(yōu)化親和力或穩(wěn)定性

• 抗體人源化：保留CDR，替換framework區(qū)域

• 抗體知識(shí)產(chǎn)權(quán)申請(qǐng)：確證序列wéiyī性

• 批次一致性分析：用于生物等效性驗(yàn)證

• 單抗篩選與文獻(xiàn)再開發(fā)：復(fù)制已發(fā)表抗體或抗原驗(yàn)證工具

二、抗體測(cè)序的主流技術(shù)路線

抗體測(cè)序技術(shù)主要分為兩大類：

1、基因測(cè)序法（Antibody Gene Sequencing）

通過RNA提取 → 反轉(zhuǎn)錄 → PCR擴(kuò)增 → NGS測(cè)序 → 翻譯為氨基酸序列

（1）優(yōu)勢(shì)：

靈敏度高，可追溯至單個(gè)B細(xì)胞克隆

適用于B細(xì)胞文庫(kù)、高通量篩選等場(chǎng)景

（2）局限：

僅能預(yù)測(cè)理論序列，無法識(shí)別翻譯后修飾或突變

對(duì)于無法獲取細(xì)胞來源的抗體（如純化產(chǎn)品）不適用

2、dànbáizhì質(zhì)譜測(cè)序（Mass Spectrometry-Based De Novo Sequencing）

通過抗體酶解 → 質(zhì)譜分析 → 肽段識(shí)別 → de novo重建蛋白全長(zhǎng)序列

（1）優(yōu)勢(shì)：

直接基于蛋白本體，不依賴細(xì)胞/核酸信息

可識(shí)別實(shí)際表達(dá)產(chǎn)物，包括修飾、突變、異構(gòu)體

適用于商業(yè)抗體、文獻(xiàn)抗體、原液抗體等多種樣本

（2）局限：

對(duì)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)和算法要求高，部分結(jié)構(gòu)（如N端阻斷）難以解析

在應(yīng)用場(chǎng)景廣泛、高度依賴序列準(zhǔn)確性的背景下，高精度dànbáizhì質(zhì)譜測(cè)序法已成為行業(yè)shǒuxuǎn。

三、高精度抗體測(cè)序的關(guān)鍵技術(shù)要點(diǎn)

要實(shí)現(xiàn)>98%的準(zhǔn)確率與>95%的序列覆蓋度，需在以下幾個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)做到j(luò)ízhì：

1、多酶酶解策略

（1）使用多種特異性酶（如 Trypsin、Glu-C、Chymotrypsin、Asp-N）進(jìn)行組合酶解

（2）產(chǎn)生多樣化的重疊肽段，避免肽段盲區(qū)

（3）有助于跨越結(jié)構(gòu)域邊界，重建長(zhǎng)序列片段

2、高分辨率串聯(lián)質(zhì)譜分析

（1）采用高精度儀器（如 Orbitrap Eclipse、timsTOF Pro 2）實(shí)現(xiàn)>120,000分辨率

（2）二級(jí)碎裂技術(shù)（HCD/ETD）用于精細(xì)獲取肽段碎片譜圖

（3）支持多電荷狀態(tài)與低豐度肽段檢測(cè)

3、AI輔助的de novo序列重建算法

（1）基于深度學(xué)習(xí)模型（如 DeepNovo、Novor、pNovo+）預(yù)測(cè)氨基酸順序

（2）與數(shù)據(jù)庫(kù)搜索結(jié)果融合，優(yōu)化匹配精度

（3）可有效識(shí)別非典型片段、修飾或突變位點(diǎn)

4、抗體框架與CDR區(qū)域智能識(shí)別

（1）利用IMGT、Abysis、IgBlast 等數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)框架區(qū)，jīngzhǔn定位CDR1、CDR2、CDR3

（2）區(qū)分輕鏈/重鏈并確認(rèn)可變區(qū)完整性

（3）支持多抗樣本中的混合序列解析

四、抗體測(cè)序常見難點(diǎn)與解決方案

五、百泰派克生物科技的抗體測(cè)序平臺(tái)優(yōu)勢(shì)

作為zhuānyè的dànbáizhì組學(xué)與抗體測(cè)序服務(wù)提供商，百泰派克生物科技構(gòu)建了一套針對(duì)抗體樣本優(yōu)化的高精度測(cè)序平臺(tái)，支持從原液、雜交瘤、表達(dá)產(chǎn)物等多種來源的一站式服務(wù)：

* 多酶測(cè)序標(biāo)準(zhǔn)流程：Trypsin + Glu-C + Asp-N 三重酶解方案

• AI算法輔助拼接：集成 DeepNovo 和數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)雙引擎

• CDR識(shí)別與框架注釋：基于 IMGT 標(biāo)準(zhǔn)，自動(dòng)標(biāo)記抗原結(jié)合區(qū)

• 全套報(bào)告輸出：提供氨基酸序列圖譜、覆蓋率熱圖、CDR區(qū)域標(biāo)注、置信度評(píng)分等

測(cè)序準(zhǔn)確率 >98%，序列完整性 >95%，已支持上百家藥企、CRO和科研單位完成抗體分析、備案申報(bào)等多種項(xiàng)目。

隨著抗體藥物市場(chǎng)的持續(xù)擴(kuò)張，抗體測(cè)序不再是“可選項(xiàng)"，而是實(shí)現(xiàn)分子溯源、優(yōu)化設(shè)計(jì)、確保質(zhì)量的基礎(chǔ)操作。高精度抗體測(cè)序不僅需要優(yōu)良的質(zhì)譜平臺(tái)，更依賴于深度算法融合 + 蛋白注釋能力 + 實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化流程的協(xié)同優(yōu)化。在百泰派克生物科技，我們不僅關(guān)注“測(cè)出"，更關(guān)注“測(cè)準(zhǔn)"“測(cè)懂"“測(cè)得快"。如果您有抗體序列解析、研發(fā)轉(zhuǎn)化、zhuānlì驗(yàn)證等方面需求，歡迎聯(lián)系我們獲取zhuānyè建議和定制方案。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

如何進(jìn)行高精度抗體測(cè)序？檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹