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更新時(shí)間：2025-02-24 19:04:57瀏覽次數(shù)：157評(píng)價(jià)
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多能干細(xì)胞 （hPSC） 三系分化定量聚合酶鏈反應(yīng) （qPCR） 陣列設(shè)計(jì)用于表征 hPSC 及其三系分化能力。hPSC，包括胚胎干細(xì)胞 （ES） 和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞 （iPS），具有自我更新的能力，能夠分化為三個(gè)胚胎胚層的細(xì)胞：外胚層、中胚層和內(nèi)胚層。該 qPCR 陣列提供體外定向或自發(fā)分化后未分化的 ES 和 iPS 細(xì)胞及其三系衍生物的基因表達(dá)譜，從而驗(yàn)證細(xì)胞系分化為三個(gè)胚層的能力。根據(jù)基因在 ES 和 iPS 細(xì)胞中與 hPSC 衍生的外胚層、中胚層和內(nèi)胚層譜系細(xì)胞相比的差異表達(dá)來(lái)選擇基因（Adewumi 等人;Bock 等人）。
qPCR 用于確定多個(gè)樣品中基因表達(dá)的穩(wěn)態(tài) mRNA 水平的變化，通常歸一化為內(nèi)部對(duì)照基因的相對(duì)表達(dá)?；蛱禺愋砸锟蓴U(kuò)增從 mRNA 逆轉(zhuǎn)錄的 cDNA 庫(kù)中的靶序列，并且與 TaqMan® 技術(shù)一樣，雜交序列特異性探針提供來(lái)自 Taq DNA 聚合酶的 5' 核酸外切酶活性的熒光信號(hào)。熒光信號(hào)的積累速率用于定量樣品 cDNA，從而定量原始細(xì)胞裂解物中 mRNA 的量。
該 qPCR 芯片包含經(jīng)驗(yàn)證的引物和探針，用于檢測(cè) 90 個(gè)基因，這些基因的表達(dá)與處于分化早期階段的未分化 hPSC 或其衍生物相關(guān)，以及 6 個(gè)內(nèi)源性（管家）對(duì)照基因。TBP（TATA 盒結(jié)合蛋白）qPCR 對(duì)照模板作為合成 DNA 陽(yáng)性對(duì)照提供。
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