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更新時間：2025-02-28 15:27:56瀏覽次數(shù)：425次

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產(chǎn)品簡介

?E3連接酶篩選與驗(yàn)證?

通過酵母雙雜交、GST Pull-down或CRISPR篩選技術(shù)發(fā)現(xiàn)候選E3酶，再通過體外/體內(nèi)泛素化實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其功能?17。
示例：研究KRAS突變時，發(fā)現(xiàn)USP25與RNF31調(diào)控KRAS的線性泛素化修飾?1。
?泛素鏈類型分析?

利用特異性泛素抗體（如K48、K63鏈抗體）或串聯(lián)泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域（TUBEs）區(qū)分泛素鏈連接方式?36。

詳情介紹

?體外泛素化實(shí)驗(yàn)?

使用重組表達(dá)的E1、E2、E3酶與底物蛋白，結(jié)合ATP、泛素分子進(jìn)行反應(yīng)，通過Western Blot檢測底物泛素化水平?26。
常用試劑盒（如Ubiquitinylation Kit）可標(biāo)準(zhǔn)化操作流程?7。

?體內(nèi)泛素化檢測?

在細(xì)胞中過表達(dá)泛素、E3連接酶及底物蛋白，利用蛋白酶體抑制劑（如MG132）阻斷降解，通過免疫共沉淀（Co-IP）富集目標(biāo)蛋白后檢測泛素化信號?26。

?泛素化位點(diǎn)鑒定?

?質(zhì)譜法?
：通過富集泛素化肽段，結(jié)合高分辨率質(zhì)譜確定具體修飾位點(diǎn)?45。
?點(diǎn)突變驗(yàn)證?
：基于生物信息學(xué)預(yù)測（如UbiNet、GPS-Uber等工具），對潛在賴氨酸位點(diǎn)進(jìn)行突變后觀察泛素化水平變化?47。