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骨髓間充質干細胞原代培養(yǎng)實驗

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所  在  地上海市

更新時間:2025-05-15 17:26:04瀏覽次數(shù):909次

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應用領域 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè)
骨髓間充質干細胞原代培養(yǎng)實驗是伊萊博生物的基礎服務項目之一,由專業(yè)的實驗人員操作完成。

一、實驗前準備?

  1. ?試劑與耗材?

    • 基礎培養(yǎng)基:α-MEM或DMEM-LG(含10%胎牛血清、1%雙抗)

    • 分離液:Percoll密度梯度液(1.073 g/ml)或直接使用全骨髓貼壁法

    • 器械:眼科剪、鑷子、1ml注射器(4.5號針頭)、200目細胞篩

  2. ?動物處理?

    • 選擇4-6周齡BALB/c小鼠或SD大鼠,脫臼處死后75%酒精浸泡5分鐘


?二、骨髓細胞提取?

  1. ?骨髓沖洗?

    • 剝離股骨/脛骨,剔除肌肉組織,用注射器(含培養(yǎng)基)沖洗骨髓至離心管

    • 關鍵點:需強力沖洗3-5次以提高細胞得率(單鼠可得約7×10?個細胞)

  2. ?細胞分離(二選一)?

    • ?密度梯度法?:骨髓懸液疊加Percoll液,2500rpm離心25分鐘,吸取白膜層

    • ?全骨髓法?:直接過濾后接種,48小時后換液去除未貼壁細胞


?三、原代培養(yǎng)?

  1. ?接種參數(shù)?

    • 密度:1×10? cells/ml(T25培養(yǎng)瓶)或2.5×10? cells/ml(培養(yǎng)皿)

    • 條件:37℃、5% CO?,第一次換液時間為接種后3小時(去除紅細胞)

  2. ?后續(xù)處理?

    • 每2-3天換液,7-10天可見梭形貼壁細胞(純度約60-70%)

    • 傳代:80%融合時用0.25%Pancreatin?消化,傳代比例1:2


?四、注意事項?

  • ?污染控制?:超凈臺紫外滅菌30分鐘,操作中頻繁火焰消毒器械

  • ?形態(tài)鑒別?:原代BMSCs呈紡錘形,混雜造血干細胞呈圓形(需通過換液逐步去除)

  • ?血清選擇?:建議使用批次驗證的胎牛血清(濃度可提升至15%促進初期貼壁)


?五、應用場景?

  • ?分化研究?:成骨/成脂誘導培養(yǎng)需從P1代開始

  • ?臨床潛力?:用于軟骨修復或神經(jīng)再生治療




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