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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2025-05-19 13:17:17瀏覽次數(shù):1260次
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AO/EB染色實(shí)驗(yàn)是一種通過熒光染料區(qū)分細(xì)胞存活狀態(tài)的經(jīng)典方法,主要用于細(xì)胞凋亡與壞死的鑒別
。以下是實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵信息:
?染料特性?
?AO(吖啶橙)?:穿透完整細(xì)胞膜,與DNA結(jié)合發(fā)綠色熒光,與RNA結(jié)合發(fā)紅色熒光
?EB(溴化乙錠)?:僅進(jìn)入膜損傷細(xì)胞,與DNA結(jié)合發(fā)橘紅色熒光
?染色結(jié)果判讀?
?細(xì)胞處理?
誘導(dǎo)凋亡后消化細(xì)胞,制備1×10?/mL單細(xì)胞懸液
?染色操作?
取25μL細(xì)胞懸液,加入2μL AO(100μg/mL)和2μL EB(100μg/mL)
混勻后滴片,加蓋玻片避光孵育1分鐘
?觀察記錄?
熒光顯微鏡下20分鐘內(nèi)計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞(藍(lán)光激發(fā)綠熒光,綠光激發(fā)紅熒光)
?染色控制?
AO/EB終濃度建議50μg/mL,避免過度染色
需設(shè)置未處理細(xì)胞對照和凋亡誘導(dǎo)陽性對照
?結(jié)果分析?
早期凋亡需與活細(xì)胞區(qū)分:觀察核固縮形態(tài)
壞死細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大和熒光彌散
肝癌細(xì)胞凋亡檢測中,AO/EB染色與TUNEL法結(jié)果一致性較高
骨肉瘤細(xì)胞凋亡研究中,該方法可定量分析不同凋亡階段細(xì)胞比例
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