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伊萊博生物科技(上海)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年

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細(xì)胞AO/EB 染色實(shí)驗(yàn)

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更新時(shí)間:2025-05-19 13:17:17瀏覽次數(shù):1260次

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細(xì)胞AO/EB 染色實(shí)驗(yàn)是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一,由經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。

AO/EB染色實(shí)驗(yàn)是一種通過熒光染料區(qū)分細(xì)胞存活狀態(tài)的經(jīng)典方法,主要用于細(xì)胞凋亡與壞死的鑒別
。以下是實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵信息:

一、實(shí)驗(yàn)原理

  1. ?染料特性?

    • ?AO(吖啶橙)?:穿透完整細(xì)胞膜,與DNA結(jié)合發(fā)綠色熒光,與RNA結(jié)合發(fā)紅色熒光

    • ?EB(溴化乙錠)?:僅進(jìn)入膜損傷細(xì)胞,與DNA結(jié)合發(fā)橘紅色熒光

  2. ?染色結(jié)果判讀?

    細(xì)胞狀態(tài)核染色特征熒光顏色
    正?;罴?xì)胞均勻綠色黃綠色(核)/紅色(胞質(zhì))
    早期凋亡細(xì)胞核固縮呈串珠狀或塊狀綠色熒光亢進(jìn)
    晚期凋亡細(xì)胞核碎裂或凋亡小體橙紅色
    壞死細(xì)胞細(xì)胞腫脹,核輪廓模糊不均勻橙紅色

二、實(shí)驗(yàn)步驟(以貼壁細(xì)胞為例)

  1. ?細(xì)胞處理?

    • 誘導(dǎo)凋亡后消化細(xì)胞,制備1×10?/mL單細(xì)胞懸液

  2. ?染色操作?

    • 取25μL細(xì)胞懸液,加入2μL AO(100μg/mL)和2μL EB(100μg/mL)

    • 混勻后滴片,加蓋玻片避光孵育1分鐘

  3. ?觀察記錄?

    • 熒光顯微鏡下20分鐘內(nèi)計(jì)數(shù)500個(gè)細(xì)胞(藍(lán)光激發(fā)綠熒光,綠光激發(fā)紅熒光)

三、注意事項(xiàng)

  1. ?染色控制?

    • AO/EB終濃度建議50μg/mL,避免過度染色

    • 需設(shè)置未處理細(xì)胞對照和凋亡誘導(dǎo)陽性對照

  2. ?結(jié)果分析?

    • 早期凋亡需與活細(xì)胞區(qū)分:觀察核固縮形態(tài)

    • 壞死細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大和熒光彌散

四、應(yīng)用案例

  • 肝癌細(xì)胞凋亡檢測中,AO/EB染色與TUNEL法結(jié)果一致性較高

  • 骨肉瘤細(xì)胞凋亡研究中,該方法可定量分析不同凋亡階段細(xì)胞比例




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