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技術文章

Zeta Life 轉染試劑轉染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享2024新

閱讀:643          發(fā)布時間:2024-12-17

Zeta Life 轉染試劑轉染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享2024新

 

為了轉染raw 264.7小鼠巨噬單核細胞我們實驗室嘗試了lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等其它轉染試劑,對于我們8000bp的質粒DNA基本轉染后都沒有熒光信號;師兄在中山大學的同學給我們推薦了他們實驗室用Zeta Life Advanced DNA RNA貨號AD600050轉染raw 264.7細胞經(jīng)驗分享。

按照中山大學師兄給出的方法并結合我實驗室情況我把自己在6孔板轉染raw 264.7細胞的相關經(jīng)驗整理如下,希望對你轉染raw 264.7細胞有一定的幫助,下面是我*用轉染raw 264.7細胞的熒光和細胞明場圖片,后期進一步優(yōu)化后的新圖片我也會隨后呈上:
一、質粒DNA準備

1、質粒DNA濃度700ng/ul(注意:①溶解于無菌雙蒸水或超純水;②無內毒素),我用QIAGEN試劑盒除去的內毒素

二、操作流程

1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板,細胞匯合度在70%左右,再進行轉染。

2、復合物制備:將質粒DNA與Zeta Life Advanced Transfection Reagent貨號AD600050轉染試劑按照1:1(12ug:12ul)關系直接混合,用移液器吹吸10-15次混勻,室溫靜止10-15分鐘。

3、將復合物加入*培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)板,并輕輕混勻,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)(不建議把復合物加入到無血清的培養(yǎng)基里面,我后期會進一步摸索此條件)。

4、轉染24小時后對細胞進行正常換液。

5、質粒DNA轉染48小時后熒光檢測轉染效率

三、Zeta Life Advanced DNA RNA轉染試劑信息:

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

數(shù)量

報價

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600025

0.25ML

1

1590

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600050

0.5

1

2390

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600075

0.75

1

2890

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600150

1.5ML

1

4490

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD600500

5ML

1

電詢

Advanced DNA RNA 轉染試劑

AD601000

10ML

1

電詢

四、注意事項:

1本轉染方法不適用在下面轉染試劑的轉染如:lipo3000、,FuGENE 6、FuGENE HD、Effectene等轉染試劑;

2細胞培養(yǎng)基:Zeta Life公司 z7181-500胎牛血清,Gibco公司DMEM;

 

 

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