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技術(shù)文章

流式細(xì)胞儀檢測A172細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告書

閱讀:1581          發(fā)布時(shí)間:2019-12-9

式細(xì)胞儀檢測A172細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告書 

一、 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 

表格一:實(shí)驗(yàn)儀器 

儀器 

廠家 

型號 

細(xì)胞培養(yǎng)箱 

Thermo Scientific

HERA cell CO2

低溫高速離心機(jī) 

64R

BECKMAN  

流式細(xì)胞儀 

BD

FACS Calibur

 

表格二:試劑 

試劑 

廠家 

DMEM 培養(yǎng)液 

Hyclone

胎牛血清 

Gibco

無鈣、鎂 PBS 7.4 (0.1 M)

自配 

Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測試劑盒 

BD

二、 實(shí)驗(yàn)步驟 

細(xì)胞培養(yǎng) 取對數(shù)生長期的 A172 細(xì)胞,按 1*105個(gè)/mL  1mL 體積接種于 6 孔板內(nèi)。無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)過夜,到轉(zhuǎn)染時(shí)使細(xì)胞達(dá)到 70%的匯合率。 

轉(zhuǎn)染 

 12.5uL siRNA 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM ,混合均勻。 

 12.5uL Lipofectamine 2000 溶于 387.5uL 無血清的 DMEM 中,混合均

勻。在室溫下孵育 5 分鐘。 

將上述兩種混合物混合(總體積 800uL,輕輕混合均勻在室溫下孵育

20 分鐘形成復(fù)合物。 

 6 孔板中每孔加入 800uL 復(fù)合物。十字法混合均勻。 

細(xì)胞在 37、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 6h 后棄上清液,并加入 10%胎牛血

清的 DMEM 培養(yǎng)液。 

染色 消化并離心收集細(xì)胞(1000rpm/min)后棄上清,加入無鈣、鎂 PBS 1mL

2 次,離心后棄上清。分別加入 100μL binding buffer、5μL Annexin V-FITC  5μL

PI 溶液,室溫避光孵育 15min。 

4. 檢測 

加入 400μL binding buffer 后以標(biāo)準(zhǔn)程序用流式細(xì)胞儀檢測,汞激發(fā)波長

488nm,計(jì)數(shù) 1 萬個(gè)細(xì)胞。 

三、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 

省略 

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