详细介绍
培养操作步骤:
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
产品属于:
中文名称 | 英文名称 | 产品规格 | 发货周期 |
Caspase-5 Activity colorimetric assay Kit | 20T|50T|100T | 1~3天 |
商品介绍:
本试剂盒适用于测定哺乳动物组织、细胞caspase-5活性。试剂盒测定原理基于Caspase-5特异水解其多肽底物N-acetyl-Trp-Glu-His-Asp-p-nitroanilide(Ac-WEHD-pNA),释放出游离的硝基pNA,后者呈黄色在405nm具有大吸收峰,用可见光分光光度比色方法测定,吸光度值对应于Caspase-5的水解活性。 |
细胞凋亡属于程序化细胞死亡,可见于各种器官和细胞,在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族,包含10多个成员。Caspase-5分子量47.7kD,与ICE有51%的同源性,在过量表达时可诱导凋亡发生。
所需仪器:酶标仪与96孔酶标板;或可见光分光光度计配100μl容积的石英比色杯。
工作波长:大吸收波长405nm,如不具备也可在400~450nm范围内测定。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将1mm3左右大?。?/span>
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
谷(标准品)英文名称: 1H-Benzotriazole因子受体样因子1抗体包装500g
谷维(标准品)英文名称: Betahistine Dihydrochloride半胱亚磺脱羧抗体包装1g
呱西替柳(标准品)英文名称: Betahistine Dihydrochloride型肝炎NS2反式调节蛋白/衰老相关的基因10蛋白抗体包装25g
呱西替柳杂质A(杨愈创木酚酯)(标准品)英文名称: Betahistine Dimesilate固酮合成CYP11B2抗体包装5g
(标准品)英文名称: INSULIN分裂周期蛋白8抗体包装1g
桂美(标准品)英文名称: Bismuth oxide 卷曲螺旋结构域蛋白5抗体包装1g
果糖二磷钠(标准品)英文名称: 2-Chloro-1,3-propanediol分裂周期蛋白16抗体包装5g
哈西奈德(标准品)英文名称: Bisoprolol fumarate有丝分裂着丝粒蛋白F抗体包装5g
核黄磷钠混合物(标准品)英文名称: Bromhexine HCl9号染色体开放阅读框115抗体包装25g
红霉(标准品)英文名称: Bupivacaine HClCTDSPL蛋白抗体包装5g
胡椒乙(标准品)英文名称: Bupivacaine HClCTDSPL2蛋白抗体包装1g
琥珀;丁二(标准品)英文名称: Butenafine HCl乙酰酯相关蛋白抗体包装1g
琥珀多西拉敏(标准品)英文名称: Captopril卷曲螺旋结构域蛋白83抗体包装250mg
琥珀泼尼龙(标准品)英文名称: Captopril二氢嘧啶相关蛋白5抗体包装5g
琥珀普卡必利英文名称: (S)-Carbidopa磷化二氢嘧啶样2抗体包装1g
: NRS-1000ATCC43897DSM3037资源名称: 强壮类芽孢杆菌 质量规格:>99%,BP2007,EP5.心肌营养1试剂盒维生A;Vitamin A
微小链霉菌Streptomyces│parvulus 质量规格:>98.5%心肌特异性肌钙蛋白T试剂盒乌头原碱;Aconine
多头节丛孢Arthrobotrys│polycephala 质量规格:HPLC>98%,标准品心肌锚蛋白重复域1试剂盒乌美司;Ubenimex
Caspase-5活性测定试剂盒盐吉西他滨
其他吉西他宾盐盐;4-基-1-(3,3-二氟-4-羟基-5-羟甲基四氢呋喃-2-基)-1H-嘧啶-2-酮盐盐;吉西他滨盐盐;盐吉西他宾
英文名称:LY-188011
其他英文名称:dFdC;dFdCyd;Gemcitabine hydrochloride;2′-Deoxy-2′,2′-difluorocytidine;Gemzar (Lilly)
产品规格:BR
包装:250毫克/1克/5克
CAS号:122111-03-9
C9H11F2N3O4•HCl=299.66
级别:BR
含量:≥98.0%(HPLC)
性状:粉末或块状物
用途:生化研究。
用途:生化研究。
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