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詳細(xì)介紹
本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用，不直接用于食品、藥品、臨床或動物的診斷或治療！
細(xì)胞屬性：
方法簡介
普諾賽實驗室分離的小鼠下丘腦元采用消化法結(jié)合元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)、化學(xué)試劑抑制法篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
普諾賽實驗室分離的小鼠下丘腦元經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠下丘腦神經(jīng)元原代細(xì)胞 | 組織來源 | 腦組織 |
英文名稱 | Mouse Hypothalamic Neuron Cells | 貨號 | YS-01X7701 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 用途 | 僅供科研實驗 |
細(xì)胞簡介：
小鼠下丘腦元細(xì)胞分離自下丘腦；下丘腦又稱丘腦下部，位于大腦腹面、丘腦的下方，是調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動和內(nèi)分泌活動的較高級中樞所在。下丘腦自前向后可分三部﹐即前部(又名視前區(qū)和視上區(qū))﹑中部(結(jié)節(jié)區(qū))和后部(乳頭體區(qū))。下丘腦具有許多細(xì)胞核團(tuán)和纖維束﹐與中樞系統(tǒng)的其它部位具有密切的相互聯(lián)系。它不僅通過和血管途徑調(diào)節(jié)腦垂體前﹑后葉激素的分泌和釋放﹐而且還參與調(diào)節(jié)自主系統(tǒng)﹐如控制水鹽代謝﹑調(diào)節(jié)體溫﹑攝食﹑睡眠﹑生殖、內(nèi)臟活動以及情緒等。下丘腦元與來自其他部位的纖維有廣泛的突觸聯(lián)系，可以接受很多沖動，為內(nèi)分泌系統(tǒng)和系統(tǒng)的中心。它們能調(diào)節(jié)垂體前葉功能，合成垂體激素及控制自主和植物功能。故提取下丘腦元進(jìn)行體外培養(yǎng)，建立下丘腦元體外實驗平臺具有重要意義。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 元細(xì)胞樣
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 0.125%
細(xì)胞培養(yǎng)方法：
1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
公司產(chǎn)品：
人支氣管成纖維細(xì)胞HBF | DNA結(jié)合抑制因子1抗體 |
過氧化還原酶1抗體 | 20號染色體開放閱讀框70抗體 |
內(nèi)皮素轉(zhuǎn)化酶1抗體 | 突變的黑色素瘤相關(guān)抗原1抗體 |
肉毒堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移酶1A抗體 | 原鈣粘蛋白16抗體 |
胃癌多藥耐藥相關(guān)蛋白 | 羥A脫氫酶β抗體 |
HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞(彝族);HYL 人腹膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL |
牛腦垂體提取物BPE | EPHB2 Others Mouse 小鼠 EphB2 / Hek5 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
IL2RB Others Human 人 IL2Rβ 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | HA Others H4N8 甲型流感 H4N8 (A/chicken/Alabama/1/1975) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
Promocell C-21160 Airway Epithelial Cell GrowthMedium KIT,呼吸道上皮細(xì)胞生長培養(yǎng)基套裝 500ml | TNFSF11 Others Mouse 小鼠 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
CM-H027人淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基100mL | 小鼠下丘腦神經(jīng)元原代細(xì)胞突變的黑色素瘤相關(guān)抗原1抗體 |
MSR1 Others Rat 大鼠 MSR1 / SCARA1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) | mOPC, 小鼠少突膠質(zhì)前體細(xì)胞 |
人導(dǎo)管癌細(xì)胞;HCC38 | A2780(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CM-H115人腦動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL SV40T轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞(亞系);293T/17 |
Hep G2人肝癌細(xì)胞 Hep G2 human hepatocarcinoma cells DMEM+10% FBS | X染色體開放閱讀框21抗體 |
鉀通道相互作用蛋白2抗體 | SELE Others Mouse 小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
膜粘連蛋白 A4抗體 | 轉(zhuǎn)錄延伸因子NELF抗體 |
G蛋白偶聯(lián)受體120抗體 | HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Texas/05/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) |
操作步驟：
1.將無菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長至80%時取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽性信號時用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
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