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小鼠胚胎干原代細胞
小鼠胚胎干細胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細胞（Embryonic stem cell，ESCs，簡稱ES、EK或ESC細胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細胞，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境，ES細胞都能被誘導(dǎo)分化為機體幾乎所有的細胞類型。進一步說，胚胎干細胞（ES細胞）是一種高度未分化細胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動物的所有組織和器官，包括生殖細胞。ES細胞具有與早期胚胎細胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細胞核大，有一個或幾個核仁，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構(gòu)簡單。體外培養(yǎng)時，細胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細胞呈淡黃色。細胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細胞彼此界限不清，細胞表面有折光較強的脂狀小滴。細胞克隆形態(tài)多樣，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細胞的直徑7 微米～18 微米，豬、牛、羊ES細胞的顏色較深，直徑12 微米～18 微米。胚胎干細胞與普通細胞有顯著差別，有其特定的生長特性和特定的標志，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎干細胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標志，這些特性和標志均可以用于對胚胎干細胞進行鑒定，除此之外，胚胎干細胞還可以在體外傳代，并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時，胚胎干細胞都能呈克隆性增殖，長期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外，胚胎干細胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與細胞衰老密切相關(guān)，多數(shù)成熟細胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細胞與成熟細胞不同的重要特點，也可能是其復(fù)制生命期限遠比體細胞長的原因。
英文名稱 | Mouse Embryonic Stem Cells | 組織來源 | 囊胚 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7728 |
細胞形態(tài) | 短梭形、多角形 | 生長特性 | 貼壁 |
產(chǎn)品名稱：小鼠胚胎干細胞
組織來源：囊胚
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
包被條件 明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次；
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 短梭形、多角形
傳代特性 可傳5-8代左右
消化液 0.025%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
方法簡介
公司實驗室分離的小鼠胚胎干采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，酶消化傳代純化制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。
質(zhì)量檢測
公司實驗室分離的小鼠胚胎干經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；
③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；
④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；
⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細胞復(fù)蘇：
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。
3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）
②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入培養(yǎng)基終止消化；
③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；
④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。
CNE1-lmp\l細胞，轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細胞系 小鼠黑色素瘤細胞,B16F1細胞 CM-H023人甲狀腺濾泡上皮細胞培養(yǎng)基100mL | 含纖維蛋白原C結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 |
Smad7抗體 | 細胞遷移誘導(dǎo)因子5抗體 |
卵黃狀黃斑病蛋白4抗體 | 蛋白酶體激活因子PA28γ抗體 |
外營養(yǎng)蛋白1抗體 | 前列腺素E2抗體 |
新型核蛋白質(zhì)1抗體 | 極光激酶A相互作用蛋白1抗體 |
NIH/3T3(小鼠胚胎細胞) 5×106cells/瓶×2 | 人母細胞瘤細胞;SH-SY5Y |
大鼠垂體瘤細胞;MMQ 腎上腺皮質(zhì)腺癌細胞，SW-13細胞 Neuro-2a[N2a;Neuro-2a]細胞，小鼠腦瘤細胞 | 786-O [786-0], 人腎透明腺癌細胞 Human |
人支氣管平滑肌細胞HBSMC | LA795(小鼠肺腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 |
Sars結(jié)構(gòu)蛋白表達株;293sars181A | CL-0251MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨細胞前體細胞)5×106cells/瓶×2 |
RWPE1細胞，人前列腺上皮細胞 鼬肺上皮細胞,MV-1-Lu細胞 小鼠海馬趾元MN-h | 小鼠胚胎干原代細胞蛋白酶體激活因子PA28γ抗體 |
頜下腺上皮細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | Tca-8113人舌鱗癌細胞 Tca-8113 human tongue squamous cell carcinoma 1640+10% FBS |
Promocell C-21010 Mammary Epithelial Cell GrowthMedium, 上皮細胞生長培養(yǎng)基(即用型) 500ml | IL12A Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IL12A / NKSF1 蛋白 (Fc 標簽) |
大隱靜脈平滑肌細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) | 肽聚糖識別蛋白1抗體 |
富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體 | 人髓核細胞裂解物HNPCL |
原癌蛋白CBL2抗體 | 胞漿型0脂酶A2抗體 |
賴缺陷型蛋白激酶1抗體 | NIH/3T3(小鼠胚胎細胞) 5×106cells/瓶×2 |
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
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