犬CRP ELISA是一种高灵敏度的双位点酶联免疫测定法（ELISA），用于犬血清和血浆样本中C-反应蛋白（CRP）的测定。

作为ALPCO在中国的区域总代理，艾美捷科技强烈推荐ALPCO销售产品 犬C-反应蛋白ELISA。产品仅用于科研，不可用于临床诊断。

犬C-反应蛋白ELISA检测原理：

双抗体夹心酶联免疫吸附测定（ELISA）的原理如图1所示。在这种测定中，样品中的C反应蛋白（CRP）与已吸附到聚苯乙烯微孔板表面的抗CRP抗体发生反应。通过洗涤去除未结合的蛋白质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗CRP抗体。这些酶标记的抗体与之前结合的CRP形成复合物。经过再次洗涤后，通过添加显色底物3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）来测定与免疫吸附剂结合的酶。结合的酶量与测试样品中CRP的浓度成正比；因此，450纳米处的吸光度是测试样品中CRP浓度的量度。测试样品中CRP的量可以从标准曲线中插值得出，并根据样品稀释进行校正。

样品收集和处理

所有血液成分和生物材料应视为潜在危险。处理和处置时遵循通用预防措施。如果血液样品出现凝块、严重溶血、脂血或样品完整性受到质疑，请记录并谨慎解释结果。以下列出的样品收集和储存条件仅供参考。样品稳定性尚未评估。

? 血清样品 - 应通过静脉穿刺收集血液。血凝后通过离心分离血清。取出血清立即进行测定或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

? 血浆样品 - 应将血液收集到含有抗凝剂的容器中，然后进行离心。立即进行测定或分装后储存于-80°C（最好）或-20°C。避免反复冻融。

? 已知干扰物质 - 浓度高于0.1%的叠氮化物和硫柳汞会抑制酶反应。

样品稀释

定量测定样品中CRP的测定要求每个测试样品在使用前进行稀释。每次进行测定时，所有样品都应以双份进行测定。推荐的稀释比例仅供参考。稀释比例应基于未知样品的预期浓度，以便稀释后的样品落在标准曲线的动态范围内。如果不确定样品水平，在运行整个板之前，强烈建议对一个或两个代表性样品进行系列稀释。

血清和血浆样品 - 推荐的起始稀释比例是1:1000。要制备1:1000的样品稀释液，将5 ?L的样品转移到495 ?L的1X工作稀释液中。这会产生1:100的稀释比例。接下来，将1:100的样品通过将40 ?L转移到360 ?L的1X工作稀释液中进行稀释。这会产生1:1000的样品稀释比例。每个阶段都要C底混合。

试剂准备

使用前将所有试剂置于室温（16°C至25°C）。

稀释液浓缩物 - 提供的稀释液为5倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩物，4份dH2O）按1:5稀释。

洗涤液浓缩物 - 提供的洗涤液为20倍浓缩液，必须用蒸馏水或去离子水（1份缓冲液浓缩物，19份dH2O）按1:20稀释。浓缩物在低温储存时可能会形成晶体。稀释前将浓缩物加热至30-35°C可以溶解晶体。

酶-抗体结合物 - 通过向每个微孔板测试条使用的1X工作稀释液中添加10 ?L酶-抗体结合物和990 ?L来计算每个微孔板测试条所需的1X工作结合物溶液量。均匀混合，但要轻柔。避免产生泡沫。

预包被ELISA微孔板 - 按提供的状态使用。打开微孔板袋，从袋中取出板。取出在测定中不会使用的所有条和孔，放回袋中并重新密封，同时放回干燥剂。

结果计算

1. 从每个孔的值中减去平均背景值（标准零的平均吸光度读数）。

2. 对每个标准的平均重复读数进行平均，并使用结果构建标准曲线。通过使用能够生成四参数逻辑曲线拟合的计算机软件来减少数据来构建标准曲线。也可以使用二次多项式（二次）或其他曲线拟合；然而，它们对数据的拟合精度会较低。

3. 从标准曲线中插值得到测试样品值。校正血清稀释因子，以得出原始样品中的CRP浓度。

ALPCO产品种类多样，可测样品来源包括人、大/小鼠、豚鼠、兔、猪、羊、狗、猴等，涉及神经生物学、骨代谢、心血管疾病和氧化应激、细胞因子与信号转导、糖尿病和肥胖症、内分泌学、甲状腺功能、肠胃病学、免疫学、生殖激素、抗体和抗原、分子诊断等多个研究领域，尤以糖尿病和肥胖症研究领域见长。

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