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JeKo-1人套細胞淋巴瘤細胞

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更新時間:2024/07/28 19:14:03瀏覽次數(shù):723

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產品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨
JeKo-1人套細胞淋巴瘤細胞
該細胞公司*,培養(yǎng)狀態(tài)下的,現(xiàn)貨一周供應,我公司可100%保障該細胞的質量,代數(shù)年輕活性好,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體 。

詳細介紹

JeKo-1人套細胞淋巴瘤細胞

當密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時,可以凍存細胞,在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管,1000rpm離心5min,棄上清,用90%培養(yǎng)液+10%DMSO的混合液重懸細胞,并調整細胞密度為4-6×106/ml,將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

含量:>1x106 個/mL,  規(guī)格:T75瓶或者1mL凍存管包裝

培養(yǎng)基:RPMI-1640(GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L),80%;優(yōu)質胎牛血清,20%。 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度。

生長特性:懸浮生長

污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:(1)干冰運輸,收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇;(2)存活細胞,收到后應繼續(xù)生長,傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

傳代操作步驟:

貼壁細胞傳代

1.提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內。

2.吸除或倒掉細胞瓶內舊培養(yǎng)液,加少量PBS潤洗細胞。

3.加入適量胰酶,使胰酶的量能蓋住細胞,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,待貼壁細胞間間隙變大、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,晃動細胞瓶,終止胰酶作用。

4.用吸管小心吹打貼壁的細胞,制成細胞懸液??刂拼荡虻牧Χ?,避免產生大量的氣泡。

5.將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),隔天觀察貼壁生長情況。

JeKo-1人套細胞淋巴瘤細胞

細胞培養(yǎng)三不要:
養(yǎng)科研細胞是生物醫(yī)學研究的基本功。有三個小經驗可以和大家分享一下:
1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關瓶子,覺得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑?知道為什么嗎?燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時候,熾熱的空氣進入瓶內。塞緊塞子放入冰箱后,空氣變冷,壓力驟降,培養(yǎng)基中的碳酸就會轉化成二氧化碳,釋放出來。培養(yǎng)基中的碳酸少了,當然會變堿。如果不燒瓶口的話,你會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會大大減慢。(當然多多少少還是會有一點越用越堿,因為室溫還是比冰箱內的溫度高)
其實燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下,你會發(fā)現(xiàn)根本就不會燒疼。如果有細菌的話,這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細菌,除非把瓶口和塞子燒紅。我在國內從來就不燒瓶口。來美國以后發(fā)現(xiàn)這里更*,超凈臺內根本就不點酒精燈。
2. 不要頻繁看細胞。對于初學者而言,養(yǎng)細胞就像養(yǎng)孩子一樣,有空就要去看看。細胞越是養(yǎng)不好,就越是經常去看。實際上看細胞對細胞的生長沒有任何好處,細胞系特別是對原代細胞或是免疫磁珠分選后,密度特別低的細胞。培養(yǎng)基中的生長因子是非常有限的。細胞好不容易自分泌一點兒促生長的因子在其周圍,形成有利于生長的局部環(huán)境。你跑去看細胞,培養(yǎng)瓶這么一晃,把因子都給晃散了。經常可以看到新手一天到晚都在看細胞,細胞老是長不好。老手細胞一扔好幾天不管,細胞瘋長。
3. 不要怕消化。在傳代的時候,初學者往往生怕細胞消化過度,早早地終止消化。細胞沒下來就使勁吹燈,吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來,用力吹打對細胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r候,37度消化過夜,細胞也沒事。我一般是等細胞*變圓后才中止消化。細胞輕輕一晃就能下來。還有,動作要輕柔,盡量不要產生氣泡。應力相當大,對細胞的傷害也是很大的。

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