重癥肌無(wú)力相關(guān)抗體-Titin Ab ELISA kit
產(chǎn)品介紹和檢測(cè)原理
據(jù)檢測(cè)，約80%重癥肌無(wú)力患者的胸腺發(fā)生變化，在這其中約10%的患者會(huì)發(fā)展為胸腺上皮細(xì)胞瘤(TET)或胸腺癌。因此盡早對(duì)胸腺瘤做出診斷，并施行胸腺切除術(shù)有助于患者取得較好的預(yù)后。
多數(shù)胸腺受影響的患者體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生針對(duì)乙酰膽堿受體的自身抗體--這種抗體可用于診斷重癥肌無(wú)力。同時(shí)，患者體內(nèi)也會(huì)產(chǎn)生針對(duì)條紋肌的自身抗體，其中即包含肌聯(lián)蛋白抗體(titin）。
肌聯(lián)蛋白是條紋肌中具有*分子量的蛋白質(zhì)。它的主要免疫區(qū)位于其中一個(gè)分子量為30KD的蛋白片段上。針對(duì)這個(gè)片段的抗體有可能會(huì)與乙酰膽堿受體的抗原決定簇進(jìn)行結(jié)合,即副腫瘤綜合癥型重癥肌無(wú)力的病因。因此在本產(chǎn)品中使用了重組的MGT30肽段來(lái)特異性檢測(cè)患者體內(nèi)的肌聯(lián)蛋白抗體。
本酶聯(lián)免疫法試劑盒經(jīng)證實(shí)，優(yōu)于基于人或猴條紋肌切片的免疫熒光法檢測(cè)。
重癥肌無(wú)力相關(guān)抗體-Titin Ab ELISA kit使用微孔板作為檢測(cè)平臺(tái)，重組的肌聯(lián)蛋白片段(MGT30肽段)包被于微孔底部，加入稀釋后的血清完成孵育，使樣品中的抗體與微孔板已包被的蛋白片段結(jié)合，固定于微孔內(nèi)。洗滌后可除去孔內(nèi)殘留液體，再使用蛋白A-過(guò)氧化物酶-TMB探測(cè)已結(jié)合的抗體，zui后在波長(zhǎng)450nm下讀數(shù)。
重癥肌無(wú)力相關(guān)抗體-Titin Ab ELISA kit檢測(cè)流程：
1 孵育樣本
分配各100μl標(biāo)準(zhǔn)品、陰性質(zhì)控品、陽(yáng)性質(zhì)控品(均無(wú)需稀釋)以及稀釋完成的血樣到相應(yīng)的微孔中，在室溫中使用水平振蕩器孵育1小時(shí)。
2 洗滌
完成孵育后將孔內(nèi)剩余液體倒出，每孔內(nèi)使用300μl稀釋后的洗滌液*清洗2-3次。洗滌完成后倒置微孔板于吸水介質(zhì)上輕拍，除去殘余液體。
3 孵育復(fù)合物
每孔加入100μl酶結(jié)合物，室溫下使用水平振蕩器孵育30分鐘
4 洗滌
重復(fù)2中步驟
5 孵育顯色底物
每孔中加入100μl顯色底物，室溫下使用水平振蕩器孵育15至25分鐘。
6 終止顯色
每孔中加入100μl終止液。
7 讀取數(shù)據(jù)
在終止后的10分鐘內(nèi)，使用酶標(biāo)儀在450nm下讀取每個(gè)孔的OD值，參考波長(zhǎng)在570nm至650nm間選擇。如有樣本OD值高于2.5，請(qǐng)使用405nm重復(fù)讀取該樣本的OD值，并在計(jì)算時(shí)使用405nm下的標(biāo)準(zhǔn)品OD值。
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