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一、产品简介

英诺思(immuno-X)小鼠CD3/CD28激活磁珠用于激活小鼠T细胞，促进T细胞增值和T细胞分化。该产品利用三维立体磁珠模拟抗原呈递细胞对T细胞的激活，ActBeads TM提供的第一信号（CD3）和第二信号（CD28）使得T细胞高效扩增，避免T耗竭。
• ActBeads™ 激活磁珠浓度为4x107个/mL。
• 磁珠粒径均yi，流式细胞仪分析时可与T细胞明显区分

二、试剂盒组分

产品名称	存储条件	缓冲液成分	功能
ActBeads™ Mouse CD3/CD28 Activator	4°C保存，避免冷冻	PBS, 0.1% BSA	通过磁珠偶联的CD3/CD28抗体激活T细胞，促进T细胞增值和分化

BSA - bovine serum albumin; PBS - phosphate-buffered saline

运输条件： 4°C运输

三、培养条件

·缓冲液：RPMI1640 培养基+10% FBS + 2 mM L-Glutamine+100 U/mL penicillin/streptomycin

·细胞因子：人或者小鼠的IL2

四、温馨提示

hIL2在人和小鼠细胞中具有同等活力
小鼠T细胞分离时，确保FACS Buffer渗透压稳定，小鼠免疫细胞非常敏感
IL7、IL15可与IL2联合使用，促进T细胞增值

五、实验步骤

1. 激活或者扩增T细胞

步骤	说明
1	分离小鼠T细胞，将其铺到96孔平底板中，细胞密度为8 x 104/孔，培养基200 μL
2	ActBeads™ 小鼠CD3/CD28激活磁珠震荡混匀后，加入到细胞中，2 μL/孔 Note: 激活T细胞时，ActBeads TM和细胞比例为1:1；诱导Treg细胞分化时，磁珠和细胞的比例应增加到2:1
3	加入IL2细胞因子，终浓度为100 U/mL
4	进行T细胞培养，5% 二氧化碳，37℃
5	培养48-72小时后，T细胞体积变大，形态多样
6	当细胞密度较高时，更换新鲜培养基或者将细胞转移至新的培养板

2. T细胞重新刺激

通常T细胞在扩增到第7-10天时，需要通过添加新鲜的ActBeads™ 和IL-2进行多次重新刺激。经过反复重新刺激后，CD8+ T细胞仍保持细胞毒性。

步骤	说明
1	将T细胞重悬后置于无菌离心管中，在磁力架上吸附2分钟
2	倒出/吸出T细胞，进行细胞计数
3	将T细胞重新铺到培养板中，密度0.5–1 × 106 cells/mL
4	培养，5% 二氧化碳，37℃