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做山羊環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)?實驗的注意事項
閱讀：1286 發(fā)布時間：2022-8-3注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數(shù)量與表格是否一致。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）
2、精密移液器、吸頭、加樣槽
3、蒸餾水或去離子水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、EP管
7、無粉一次性乳膠手套
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
注意：試劑盒內(nèi)酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實驗后1 個月內(nèi)使用完畢。產(chǎn)品過期時間以盒子上的標簽為準，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標儀。
【樣本要求】
1.樣本類型和采集
血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
細胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液，用PBS（0.01 M，pH 7.4）將細胞洗一遍。用細胞刮刮下細胞（不能用胰酶和EDTA 處理），加入2-5 mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。懸浮細胞可省略。收集細胞懸液，4℃ 1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS潤洗3次。加入適量的預冷PBS或非變性細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞,通常6孔板一個孔的細胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融3次，使細胞充分裂解,也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融。
【注意事項】
1. 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
2. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
3. 為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
4. 要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。
5. 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
6. 顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，最佳顯色時間會有所不同。
7. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
8. 本試劑不同批號組分不得混用。
9. 揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。
【結果計算】
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。